槐花米中芦丁的提取分离与鉴定.docVIP

槐米中芦丁的提取与分离 摘要：利用芦丁在沸水中溶解度大的性质将其在沸水中进行提取，而芦丁与其他水溶性化合物可借助聚酰胺柱色谱予以分离。 关键词：槐花米；芦丁；槲皮素；提取；分离；鉴定 Rutin）又称芸香苷，广泛存在于植物界中，现已发现含芦丁的植物至少在70种以上，如烟叶、槐花、荞麦和蒲公英中均含有。尤以槐花米（为植物Sophora japonica L 的未开放的花蕾）和荞麦中含量最高(含量可达12-16%)，可作为大量提取芦丁的原料。芦丁是由槲皮素（Quercetin）3位上的羟基与芸香糖（Rutinose）〔葡萄糖（Glucose）与鼠李糖（Rhamnose）组成的双糖〕脱水形成的苷。 芦丁为浅黄色粉末或极细的针状结晶，含有3分子结晶水，熔点为174~178℃，不含水的芦丁熔点为188℃。含2分子结晶，熔点为313~314℃。水溶解度：冷水中为1:10000；沸水中1:200；冷乙醇1:650；热乙醇1:60；冷吡啶1:12。微溶于丙酮、乙酸乙酯，不溶于苯、乙醚、氯仿、石油醚，溶于碱而呈黄色。不含结晶水的槲皮素熔点为316℃，它们的结构式如下： 芦丁（Rutin） 槲皮素（Quercetin） 芦丁分子中具有较多酚羟基，显弱酸性，易溶于碱液，酸化后又可析出，因此，本实验采用碱提取酸沉淀法提取芦丁。 2 实验内容与步骤 2.1仪器与试剂 仪器：紫外灯 蒸馏装置一套 250mL烧杯（一只） 500mL烧杯（两只） 100mL三角瓶（两只） 纱布 色谱柱（Ф1.5×30cm） 玻璃板 硅胶G板 试剂：甲醇 70%工业乙醇 槐米 层析用聚酰胺（60-100目） 芦丁标准样 2.2 芦丁的提取 将粉碎好的槐米10g倒入500mL烧杯中，加沸水150mL，煮沸1h(在煮沸的过程中可补加水），趁热用纱布过滤，残渣加入100mL水，再煮沸30分钟，共进行两次，将两次滤液混合，放置，冷却，即有大量黄色沉淀生成，抽滤。 2.3 芦丁的提纯分离 将以上得到的粗芦丁纯品约1.0g, 加甲醇4mL，使之溶解，再加层析用硅胶 （60-100目）3.0g，用刮刀轻轻搅拌，在水浴上赶去甲醇，待用。 将色谱柱垂直架在铁架台上。关闭柱塞，加蒸馏水约至色谱柱一半高。将4.5g层析用聚酰胺倒入烧杯中，加蒸馏水50mL，轻轻搅拌，防止颗粒过细，再打开柱塞使柱内水不断流出的同时，将烧杯内的聚酰胺缓缓加入，用玻璃棒轻轻敲打色谱柱，使填料均匀无气泡。当色谱柱顶部下降到距层高度约1.5cm时，关闭柱塞。将上述拌好硅胶的粗芦丁样品倒入柱内，勿有气泡，再盖上剪好的圆形滤纸。 用70%工业乙醇洗脱，当有淡黄色的液体从柱下流出时开始收集洗脱液，每次约20mL，共接受4瓶，并依次编好号。 用2.5×7.5cm的硅胶G板，每板上点芦丁标准样与接受瓶中的溶液，放入层析缸中，加盖，进行展开（展开剂为：乙酸乙酯：丁酮：甲酸：水=5:3:1:1）,当展开剂前沿距板端约1cm时，取出晾干。 在紫外灯下观察斑点，将只含芦丁的接受瓶溶液合并入一个圆底烧瓶中，蒸去大部分溶剂后，趁热倾入一只100mL的三角瓶内，冷却即有芦丁析出，抽滤，晾干，计算收率。 2.4 硅胶G板的制备 将硅胶G与0.7%的羧甲基纤维素钠（CMC）水溶液1:3在研钵中研末混匀，涂于干净的玻璃板上，晾干后，于110℃下活化0.5小时，放在干燥器内备用。 3 结果和讨论 3.1 数据处理 所用槐米质量为10g，取得粗产品芦丁约0.98g，最后得到芦丁纯品0.28g，本次产品的产率是0.28/0.98=28.57%。 3.2讨论 从槐米中提取芦丁时要直接加沸水直接提取，因为芦丁只在沸水中的溶解度很大，所以才能将更多的芦丁从槐米中提取出来。 粗品芦丁加入硅胶的时候要轻轻搅拌，细的颗粒要控制好颗粒尺寸，不要太细也不要太大，以防止影响洗脱时的产率。 装色谱柱的时候，要缓缓加入聚酰胺，防止出现气泡，使柱子填充均匀。此外，不要过多的搅拌聚酰胺颗粒，控制加入的聚酰胺不要太实和太虚，太实分离太慢，太虚分离不完全。 在点样分析鉴定洗脱下来的产品时，用毛细管点样时应在一个点点样，使得点样范围较小，防止其在硅胶G板上出现拖尾现象，也不宜使同一板上点的试样与标准样距离太近而相互影响，但它们应该在同一水平点样线。 蒸馏出乙醇的温度大约在80℃左右，且不会变化，若温度升高，则表明有其他液体被蒸出，此时应该停止蒸馏。 本次实验产率较低，可能存在的主要原因一方面是由于槐米中芦丁的含量本