实验二 槐花米中芦丁的提取与检识.docVIP

实验二 槐花米中芦丁的提取与检识 一、实验目的 1. 通过芦丁提取与精制，掌握碱溶酸沉法提取黄酮类化合物的原理和操作。 2. 掌握黄酮类化合物的主要性质及黄酮甙的检识方法。 二、主要化学成分的结构及性质 芦丁（Rutin）广泛存在于植物界中，现发现芦丁的植物至少在70种以上，如烟叶、槐花、荞麦和蒲公英中均含有。尤其以槐花米（为豆科植物槐Sophora japonica L.的干燥花蕾）和荞麦中含量最高，可作为大量提取芦丁的原料，芦丁是由槲皮素（Querecetin）3位上的羟基与芸香糖（Rutinose）脱水而成的甙类化合物。 芦丁为淡黄色粉末或针状结晶，含有三分子的结晶水，熔点为177-178℃。芦丁略溶于热水（1：200），难溶于冷水（1：8000），溶于热甲醇（1∶7）、冷甲醇（1∶100）、热乙醇（1∶30）、冷乙醇（1∶650），难溶于醋酸乙酯、丙酮，不溶于苯、氯仿、乙醚、石油醚等，易溶于吡啶及稀碱液中。 芸香苷 R=－葡萄糖－鼠李糖 槲皮素 R=H 三、实验原理 由槐花米中提取芦丁的方法很多，目前我国多采用碱提酸沉的方法，其原理是：根据芦丁分子中具有酚羟基，显弱酸性，能与碱成盐而增大溶解度，向此盐溶液加入酸，调节pH值，则芦丁又重新游离析出，从而获得粗制芦丁。 除此方法外，还可以采用沸水提取或醇提取法。 四、实验器材与试剂 器材：铁架台，烧杯，电炉，烘箱、水浴锅、三角烧瓶，布氏漏斗，滤纸，试管，层析槽，石棉网，毛细管等。 试剂：芸香苷标准品，生石灰，HCl，乙醇，甲醇，镁粉，醋酸镁，AlCl3，氯仿，铁氰化钾等。 五、实验内容 1、实验操作流程图 2、具体操作步骤 芦丁的提取 称取槐花米20g，置于干燥的研磨中用钵棒挤压成粗粉。称取1-1.5g石灰粉（生石灰），置于干净的小研钵中加入10ml水后研成乳液备用。将粉碎的槐花米置于500ml的烧杯中，加水300ml，在搅拌下加入石灰乳，调节pH至8-9，加热微沸，维持pH值至30min，趁热抽滤。弃去滤渣，冷却至60-70℃，用浓HCl调至pH4-5，静置1h，析出精制芦丁，抽滤，弃去滤液，收集精制芦丁。将精制芦丁悬浮于蒸馏水中，加热煮沸15min，然后趁热过滤，弃去不溶物，充分静置，过滤，收集芦丁结晶，在60-70℃干燥，得到芦丁精制品。 芦丁检识 取芦丁3-4mg，加乙醇5-6ml使其溶解，分成四份做以下实验： ① 盐酸-镁粉反应：取试样溶液各2ml，分别置于两支试管中，各加入镁粉少许，再加入盐酸数滴，观察并记录颜色变化。 ② Molish反应：取试样溶液各2ml，分置于两支试管中，加10％α-萘酚乙醇溶液1ml，振摇后倾斜试管45°，沿管壁滴加1ml浓硫酸，静置，观察并记录两液面交界处颜色变化。 ③ 醋酸镁反应：取两张滤纸条，分别滴加试样溶液后，加1％醋酸镁甲醇溶液2滴，于紫外灯下观察荧光变化，并记录现象。 ④ 三氯化铝反应：取两张滤纸条，分别滴加试样溶液后，加1％三氯化铝乙醇溶液2滴，于紫外灯下观察荧光变化，并记录现象。 （3）薄层色谱检识 薄层板：硅胶G-CMC-Na 试 样：自制1％芸香苷乙醇溶液 对照品：1％芸香苷对照品乙醇溶液 展开剂：氯仿-甲醇-甲酸（15∶5∶1） 显色剂：喷雾1％三氯化铁和1％铁氰化钾水溶液，临用时等体积混合 六、实验结果与分析 附 薄层层析操作具体步骤 铺板：先配置0.5%的羧 3 槐花米粗粉20g 加水300ml，用石灰乳调节pH至8-9；加热至微沸，维持pH至30min，趁热抽滤 残渣（弃去） 滤液 放置，冷却60-70℃，用浓HCl调至pH4-5，静置1小时，抽滤 滤液（弃去） 沉淀（精制芦丁） 重结晶 残渣（弃去） 滤液 芦丁（精制品） 静置，过滤，在60-70℃干燥