烟草过氧化物酶Ⅰ的紫外可见吸收光谱研究.pdfVIP

第24卷，第7期 光谱学与光谱分析 2004年7月 and JuIy，2004 SpectroscopySpectralAnaIysis 烟草过氧化物酶I的紫外．可见吸收光谱研究 夏炳乐，李敏莉，刘清亮，朱晓兰 中国科学技术大学化学系，安徽合肥230026 I为一含血红素的酸 摘要通过对烟草过氧化物酶工(TOP工)的紫外一可见光谱进行分析，证实了TOP 红移。变性剂脲对TOPI的紫外一可见光谱的影响结果表明，当加入变性剂后，变性的TOP工可能发生了 去折叠的结构变化，使肽链充分伸展。向脱铁烟草过氧化物酶H)P工加入相同量的Fe(Ⅲ)，Fe(Ⅱ)，Cu 变化，sOret带的最大特征吸收峰均发生不同程度的蓝移，且峰强减弱，口带和口带特征吸收峰位置基本不 变，但二者的相对峰强均略有减弱。 主题词 烟草；过氧化物酶；紫外一可见吸收光谱 中图分类号：0554+．6文献标识码：A 文章编号：1000—0593(2004)07—0830—04 引 言 1实验部分 在研究生物大分子的溶液构象时，紫外一可见吸收光谱 1．1仪器与材料 是一个十分重要的方法。它对测定样品没有特殊要求，只需 1．1．1仪器 处于溶液状态即可，因此紫外光谱在探索生物高分子结构与 uV／viS-Lambda 功能的关系上可以获得有意义的信息¨’…。 蛋白质在紫外光范围内(250～300m)的光吸收主要是 海)；电导率仪(上海)；微量进样器(上海)；可调移液管， 由于芳香族氨基酸色氨酸、酪氨酸，其次是苯丙氨酸和组氨 Transferpetteplunger-operated 酸的电子激发引起的。在紫外光区能吸收某一波长光的基团 秒表(上海)；超级恒温水浴装置(上海)。 称为生色团，生色团的吸收光谱通常受溶剂的性质如折射 1．1．2材料 率、解离度、氢键等的影响，当生色团的环境经受一定的变 标准牛血清蛋白(上海生化试剂厂)；高纯蛋白酶TOP 化时，它的吸收光谱会产生变化，吸收峰会向短波或向长波 方向移动(分别称为蓝移或红移)。3‘5J。 金属蛋白的电子吸收光谱中，除了蛋白质通常的吸收带 所用水为Milli_Q超纯水。 (如在280nm，是由于L．苯丙氨酸和L-酪氨酸的芳香氨基酸1．2实验方法 残基的升丌+跃迁)以外，还有金属离子正d跃迁吸收带和金 1．2．1普通紫外一可见吸收光谱的测定 属离子与配体之间的电荷转移带。具有未充满的d轨道的过 000L·mol～· 渡金属离子，其击d跃迁通常是低强度(e1 mo卜L_1 别以0．02 TriS-HCl(pH6．0)的缓冲溶液溶解，在 cm。1)。这是根据电子跃迁选择性规则，这种跃迁是被禁止uV／vis_ktmbda 2分光光度计上测紫外吸收光谱，以各自缓 000L·mol。1 的。金属配合物的电荷转移光谱要强得多(e1 冲液作为参比液，重复测定3次，在200～700mn范围扫描。 ·crn。1)，并且通常出现在紫外区。因此，通过蛋白质中的这 1．2．2紫外吸收系数测定 些氨基酸所处环境的紫外一可见光谱可用来推测蛋白质分子 将TOPI纯品用去离子水在4℃下透析至溶液电导小 的构象及与环境的作用∞一J。