4个引进甜菜品种DNA指纹图谱的建立.pdfVIP

2011年第 2期 中 国 甜 菜 糖 业 20l1No．2 2011年 6月 CHlNA BEET ＆ SUGAR Jun．201l 文章编号：1002—0551(2011)02—0005—03 4个引进甜菜品种 DNA指纹图谱的建立 刘巧红 ，吴玉梅 ，罗成飞 ，刘乃新 ，杨 林 ，王皙玮 ，袁 肖寒 (1．哈尔滨工业大学食品科学与工程学院，黑龙江 哈尔滨 150086；2．黑龙江大学农作物研究院／ 中国农业科学院甜菜研究所／农业部甜菜品质监督检验测试中心，黑龙江 哈尔滨 150080； 3．东北农业大学生命科学与生物技术研究中心，黑龙江 哈尔滨 150030) 摘 要 ：利用 ISSR标记技术，对4个引进的甜菜品种建立DNA指纹 图谱。结果显示，用筛选 出的 1条 引 物的PCR扩增指纹图谱即可将这4个品种区分 ，该引物共扩增 出12个清晰务带，其 中6个为共有带，多 态性为50％，4个品种分别有 自己的特征带。研究结果表明，利用ISSR标记指纹能够从DNA水平上明确 区分甜菜不同品种 ，为甜菜种质鉴定提供 了一种有效方法。 关键词 ：甜菜；ISSR；DNA指纹 中图分类号 ：$566．3 文献标识码：A doi：10．3639／j．issn．1002—0551．2011．02．002 甜菜是主要的糖料作物之一，目前我国甜菜生 个新 的方法。 产上应用 的品种较多 ¨，以往 区分 、鉴定不 同品 种 ，主要以植株形态和倍数性及生理生化指标为 1 材料与方法 主，不仅鉴定工作量大 ，时间周期长 ，受季节 限制 ， 而且可靠性差，而利用分子标记技术只需对甜菜种 1．1 甜菜材料 子幼苗进行DNA检测就可以明确其属性，节省了 4个甜菜品种为 国外多粒种，均为2009年在 大量时间，提高了效率，是种子鉴定技术的一个重 国内种子市场购买，材料名称及代号见表 1。 大突破。ISSR(Intersimplesequencerepeats)分子 表 1 甜菜种子材料信息及编号 标记技术具有 DNA样品用量少 ，操作简单 ，无需预 先知道试验材料基因组 DNA序列，实验成本低 ，重 复性好 ，能提供丰富的关于基因组的信息等优点， 已广泛用于遗传多样性分析、绘制DNA指纹图谱、 品种鉴定等研究中 ’，显示 出了广 阔的应用前 景，目前，ISSR标记技术在甜菜种子鉴定方面的应 1．2 总 DNA提取与检测 用尚未见文献报道。本研究尝试利用 ISSR标记技 将蒸汽灭菌后的培养土转入培养钵或花盆中， 术对4个引进多粒甜菜品种，建立 DNA指纹图谱 ， 播种甜菜种子，20～25℃室温培养，长出两片子叶 为甜菜种子的检测 、鉴定及遗传差异的分析提供一 时，每个品种分别取 15个单株的叶片混合，无菌水 冲洗干净，无菌滤纸吸干叶片表层水分，取4O～6O 收稿 日期：2010～11—12 mg转移到 1．5ml离心管，用改进的CTAB快速提 基金项 目：国家甜菜产业技术体系项 目(nycytx一25—11)；圉家及 取法进行总DNA的提取，详细步骤参见DYCheng 黑龙江省 自然科学基金 30771373；C200807；C201027)； 等 的文献 。用 0．8％ 琼脂糖凝胶 电泳检测 黑龙江省教育厅项 目(2010)；围家科技项 目(2009GB2B200107)； 哈尔滨市科技创新人才研究专项资金项 目(2009RFLXN013)。 DNA的质量，估算其浓度，并将最终质量浓度调至 作者简介 ：刘巧红(1970一)，女，高级农艺师，主要从事甜菜遗传 20～25ng／¨L。 育种研究