制备色谱操作条件的优化.pdfVIP

维普资讯 ；2一j 生物技术通报 BiotechnologyInformadon 2000年第2期 · 综述与专论 · 制备色谱操作条件的优化 0ptimizationoftheOperationa ConditionsinPreparative LiquidChromatography 李伟 欧阳藩 }03 LiW ei OuyangFan 中国科学院化工冶金研究所生化工程国家重点实验室，北京 100080 SatteKeyLabofBiochemicaln1gine ng，Inst (；hem．Metall，Chine~AcademyofSciene~，Bdjiag100080，China 摘 要：色谱优化是蛋白质生产制备工艺开发中必不可少的一步。本文讨论了不同的优化 目标，介绍了目前常见的 优化方法，特别是实际应用中的原则及实验方法 ，对涉及优化的基本概念也做了说明。 A美I蕾词： ；些 锄疫 墚 彖件 I；~sttact=0timizationisakeyandm 商 blestep 面∞ d札 nforproteinproduction．Startingfr0mdifferent0pti— mi~tino functions．thecomrtrmdyusedmethodsaledi~ussed，with爿)ecial o∞trat0fl。l1practicalrulesandexperimental techniques．Relat~ cotqcept~anddefinitionsaxebrieflyint~ uced． Keywords=Prqmratlvech鲫 t0 即 hy；optimization 1 前盲 色谱优化首先要明确优化目标，如产率、比产率 目前的蛋 白质色谱分离，就其应用，一般可分成 确立参数及各参数间的关系．通过模拟或实验 ，确定 实验室制备和生产制备。前者通常是为了获得一定 最佳点或范围，即优化条件。 数量的纯品，用于进一步的实验工作，如测定蛋 白的 下面介绍几个与制备色谱优化有关的概念。 物理 ／化学参数，研究其生物学、药学、毒理学性质 2 基本概念 等。因用量不是太大，一般为了快速获得纯品，过程 2．1 色谱指标L3，4 很少或仅做初步优化。成本在此阶段不是主要的考 2．1．1 处理量 (throughput) 指柱子在单位时间 虑因素。 内处理样品的数量，即处理量=处理数量 (sample 用于生产的色谱制备与此完全不同。生产过程 size)／处理时间。 必须考虑成本与产率，且工艺需对上游的变动，如原 2．1．2 产率 (productivity，productionrate) 产率 料的组成波动有相当的适应，故工艺必须经过优化。 指单位时间内样品转变成产品(一定纯度)的量。也 由于生产管理上的要求 (如 GMP等)，条件一旦确 有定义为单位时间内单位体积 的填料分离出的产 品 定，很难再做变动，故优化需在过程开发阶段确定下 量_5J。后者 比前者多一个填料体积项。产率与处理 来 。 量通过得率 (回收率，见下一概念)联系在一起，即 一 个特定产品的分离，往往涉及多个步骤，多种 产率=处理量 ×得率。 方法。方法的选定和步骤的衔接以及每步方法中条 2．1．3 得率 (回收率，yield，r~overyyield) 某组分 件参数的初步确立，均需以优化思想为设计指导原 纯化后所得的量与样品中该组分的量之比。蛋 白得 则_1·，但本文重点不在于此。本文中的优化指在 率应通过测活确定。 以上工作完成后，针对具体色谱工艺操作条件的优 2．1．4