利用离子交换色谱快速纯化α淀粉酶.pdfVIP

利用离子交换色谱快速纯化 α-淀粉酶 李 汉 李华儒 西（北大学分离科学研究室 西安 710069） 提要 本文开发了一个用强阴离子高效液相色谱分离纯化 -淀粉酶的的新方法。详细讨论了纯化的最佳条件。 在给定的条件下纯化工业 -淀粉酶，其活性回收率达96%，比活性为388u/mg蛋白，纯化倍数提高30倍，经 SDS分析，得到分子量分别为58K和33K两条 -淀粉酶谱带。此法纯化 -淀粉酶简单，快速，效率高。不 仅能纯化工业粗酶，也可纯化其它来源的 -淀粉酶。 关键词 离子交换色谱，-淀粉酶，纯化 1 前言 -淀粉酶是一种催化淀粉水解酶，主要来源于 地分离纯化了工业粗酶，获得了高纯度产品，其活性 动物胰、唾液、血液、尿、细菌、霉菌和各种高等植物， 回收率＞88%，Kato等[]也用高效疏水色谱纯化了 常用作食品添加剂。高纯度的 -淀粉酶可作为酶试 -淀粉酶粗品，回收率为90 。但是，利用高效液相 剂，研究生物作用的特性、酶反应机理，测定生化反 离子交换色谱纯化 -淀粉酶国内外尚未见报道。本 应的平衡常数。为了获得高纯度的 -淀粉酶，一些 研究利用我们自己合成的强阴离子交换柱 L（- 作者[l-4]利用软基质的离子交换色谱和亲和色谱分 SAE）很好地分离了 -淀粉酶粗品，其活性回收率 离纯化了 -淀粉酶的粗酶提取液。但是，软基质色 高达96%，比活性达388u/mg蛋白质，纯度提高30 谱介质的机械强度小，受压易变形，分析速度慢，分 倍。此法的研究成功为大规模制备高纯度 -淀粉酶 离效率低，柱寿命短，固定相对pH、离子强度和压力 提供了一个新工艺路线。 非常敏感，反复使用时配体碎片容易脱落，由于以上 2 实验部分 缺点，软基质色谱有逐渐被硬基质色谱取代的趋势。 2.1 标准酶液配制 在硬基质色谱应用方面，李华儒等[5]首次合成一种 用微量天平准确称取5mg高纯度的 -淀粉酶 对 -淀粉酶具有特异亲和能力的色谱介质，并成功 接（下页） 本文收稿日期：1993年1月8日，修回日期：1993年4月13日 *通讯联系人 接（上页） HighPerformanceLiquidChromatographic(HPLC)Determination ofTracePatulinandPenieillicAcidbyPrecolumnDerivatization with4-(2-Phthalimidyl)BenzoylChloride GuoYufengandFuChengguang (CentreofPhysicalandChemicalAnalis,HebeiUniversity,Baoding,071002) Anewandsensitivemethodwasdevelopedforthedeterminationoftracepatulinandpenicillieacidby HPLCusingultravioletdetection.Themethodinvolvestheesterificationofpatulinandpenicillicacidbyuse ofaderivativereagent,4-(2-phthalimidyl)benzoylchloride.Theesterifiedtoxinsweresimultaneouslysepa- ratedonanODScolumnwithacetonitrile-water(47:53,V/V)underacidicconditionasthemobilephaseand detectedatUV 300nm.Thedetectionlimitsofpatulinandpenicillicacidwere2.0pmoland10pmol respectively. Keywords highperformanc