不同构象DNA疫苗在体内外表达差异的研究.pdfVIP

2013年《药物分析杂志》优秀论文评选交流会论文集 4讨论 4．1本实验采用LC—MS／MS法测定半夏泻心汤中18个药效成分：黄芩苷、黄芩素、汉黄芩苷、汉黄芩素、 野黄芩苷、甘草苷、甘草素、异甘草苷、异甘草素，小檗碱、黄连碱、药根碱、巴马汀，人参皂苷Rb。、人参皂苷 Re、人参皂苷Rg．、甘草酸和甘草次酸在大鼠血浆中的浓度。该方法与测定上述成分传统的HPLC和CE等 检测方法相比，具有专属性强、分析速度快的特点，并且与LC—MS、UPLC—MS等方法相似，具有较高的灵 敏度和准确度，可应用于半夏泻心汤在大鼠体内的多成分药代动力学研究。 4．2优化质谱检测离子发现，甘草苷与异甘草苷、甘草素与异甘草素互为同分异构体，分别具有相同的检测 离子(m／z 验在优化质谱参数减少离子干扰同时，亦对上述化合物进行了色谱分离。考察流动相甲醇一水和乙腈一水 系统，发现前者利于黄酮及生物碱成分的分离，且当甲醇比例达92％时，人参和甘草皂苷成分色谱峰保留适 mmol·L。1醋酸铵的0．1％甲酸溶液时对各成分分离 中；考察流动相的水相分别为纯水、0．1％甲酸以及含5 的影响，发现含一定量醋酸铵的甲酸溶液可以改善各成分色谱峰形并提高汉黄芩苷、野黄芩苷、甘草素和异 mmol·L。1醋酸铵)为流动相梯度洗脱，12 甘草素的离子化效率。因此本实验选择以甲醇一0．1％甲酸(含5 min内各成分分离良好。 4．3考察血浆样品前处理方法，比较甲醇沉淀蛋白、乙酸乙酯或特丁基甲醚萃取法，发现前者不利于黄芩 素、人参皂苷趾，、甘草次酸等极性较弱成分的溶出，且基质效应较高；而后者对多数黄酮成分及生物碱成分 提取回收率较低。最终采用甲醇沉淀与丙酮一乙酸乙酯混合溶剂萃取相结合的方法处理血浆样品。结果表 明该法可同时获得各成分较高的灵敏度(定量限0．39～2．49 量成分的浓度测定。 4．3大鼠灌服半夏泻心汤后，18个活性成分中黄芩苷和汉黄芩苷的吸收入血量最高，AUCm。、分别达到 芩苷在大鼠体内均呈现双峰吸收，出现在给药6h后，推测双峰吸收的原因可能与肠道菌群的代谢转化作用 相关Ⅲo；tt草苷在大鼠体内达峰较快，T。。，为0．50h，但同时清除率也较高；甘草素半衰期较长，tl／2z达16．9 h；异甘草苷在血中未能检出，推测其在体内水解为异甘草素发挥作用怛6|。 生物碱成分小檗碱、黄连碱、药根碱和巴马汀在体内亦呈现多峰吸收，半衰期较长，均大于13h，与近两 年来小檗碱的药代动力学研究相符[20，27J。结合本课题组研究，发现生物碱无肠道菌群代谢过程，肝脏P450 酶对其代谢影响较大，因此，生物碱在体内的多峰吸收与其在体内的肝肠循环相关。人参皂苷成分中仅人参 的体内转化相关心副；甘草酸口服后亦经胃肠道细菌水解成相应的苷元即甘草次酸吸收人血，血中持续大量 存在的主要是甘草次酸，甘草酸含量相对较低，与文献报道旧J一致。 4．4研究结果表明；大鼠口服半夏泻心汤后血浆中检出15种药效成分，分别为黄芩苷、黄芩素、汉黄芩苷、 汉黄芩素、野黄芩苷、甘草苷、甘草素、异甘草素、小檗碱、黄连碱、药根碱、巴马汀、人参皂苷Rb．、甘草酸和甘 草次酸。由药动学参数可知，上述成分在体内吸收量和清除率差异较大、吸收和消除快慢不同，可能与半夏 泻心汤的多重药效直接相关，后续将就半夏泻心汤多成分的体内过程及发挥药效的物质基础作进一步研究。 参考文献(略) 不同构象DNA疫苗在体内外表达差异研究 赵晨燕，黄维金，刘强，王佑春 (中国食品药品检定研究院，北京100050) 摘要目的：研究DNA疫苗构象对体内和体外表达的影响。方法：分别构建绿色荧光蛋白表达质粒(pcDNA3．1一EGFP)和 一8— 2013年《药物分析杂志》优秀论文评选交流会论文集 对表达效率的影响进行分析，前者用脂质体介导转染293FF细胞，用流式细胞仪检测EGFP的表达情况；后者通过接种BALB／ h 用小鼠活体成像技术持续观察接种后18d的体内荧光素酶的荧光信号强度情况，结果显示：接种后0．2d观察到荧光，之后强 度持续开始增强，至第5d达到平台期，维持