复方麻杏石甘汤对放射性肺损伤TGF-βSmad信号通路调控作用的验证的研究.pdfVIP

复方麻杏石甘汤对放射性肺损伤 TGF- βSmad 信号通路调控作用的验证研究 林胜友 周罗瑜 许远 杭州市肿瘤医院 杭州市癌症中心 国家自然基金资助项目（No 摘要：[目的] 本研究通过RNA干扰技术，特异性沉默TGF-β1基因，验证复方 麻杏石甘汤通过TGF-β/Smad信号通路调控，减轻放射性肺损伤的机制。 [方法] 1、清洁级SD大鼠分为中药组和正常对照组，根据临床成人剂量的15倍灌胃3 天后制备中药复方含药血清；2、细胞培养，射线照射，频率为3.64Gy/min，总 剂量为8Gy；3、RNA干扰特异性沉默TGF-β1基因，PCR检测TGF-β1 mRNA；4、 CCK-8法检测细胞活力，流式细胞仪检测细胞凋亡；5、（Western-blot）检测 smad蛋白水平。 [结果] 1、与空白对照、阴性对照组比较，TGF-β1基因沉默 组TGF-β1mRNA下降，差异有统计学意义（P0.05），针对TGF-β1基因特异性 siRNA表达载体能够显著抑制靶基因的表达；2、与正常血清+siRNA组比较，含 药血清+siRNA组的细胞活力下降，差异有统计学意义（P0.05），沉默TGF-β1 基因可抑制放疗后肺泡II型上皮细胞增殖，加入含药血清仍能抑制细胞增殖；3、 与正常血清+siRNA组比较，含药血清+siRNA组细胞凋亡率上升，差异有统计学 意义（P0.05），沉默TGF-β1基因对放疗后肺泡II型细胞凋亡无影响，加入 含药血清能促进细胞凋亡；4、与大鼠血清+siRNA组比较，含药血清+siRNA组 P-Smad2、P-Smad3下降，Smad6、Smad7上升，差异有统计学意义（P0.05）， 沉默TGF-β1基因可阻断放射性肺损伤TGF-β/smad信号通路，加入含药血清仍 能传导该信号通路。 [结论] 复方麻杏石甘汤除了通过TGF-β/Smad信号通路， 可能还通过调控其他信号传导通路干预放射性肺损伤。。 关键词：放射性肺损伤；复方麻杏石甘汤；RNA干扰；TGF-β/Smad信号通路 Research of the Effect on Proving of RNA Interfer to Compound MaXingShiGan Soup Regulate and Control Radioactive Lung Injury TGF-β/Smad Signaling Pathways. Abstract : [Objective] This experimental research makes TGF-β1 gene specificity silence with RNA interference, proving compound MaXingShiGan soup regulate and control radioactive lung injury through the TGF-β/Smad signaling pathways. [Methods] 1.Total of 18 clean sd rats were randomly divided into two groups, Chinese medicine group and normal control group,with 12 rats and 6 rats. According to the clinical adult dose of 15 times the preparation of traditional Chinese medicine compound containing medicine serum,giving sd rats gavage twice a day for three days,collect blood after last 1-2h. 2.The total dose of radiation to cell is 8Gy, frequency 3.64Gy/min. 3. After subculture ,using RNA interference specificity silence TGF-β1 gene.The level of TGF-β1mRNA was analyzed by PCR.4.The expressions of cell viability were analyzed by cell coun