高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱联用检测食品中五种硒形态.pdfVIP

201l食品安全技术与标准国际研讨会暨AOAC中国区会议论文集 高效液相色谱一电感耦合等离子体质谱联用 检测食品中的五种硒形态 王丙涛，谢丽琪，林燕奎奉，颜治，王楼明 深圳出入境检验检疫局，广东深圳518035 PRPX．100色谱柱 250 硒代蛋氨酸 SeMet 、硒代胱氨酸 SeCys2 和硒代乙硫氨酸 SeEr 的方法。采用Hamilton mmx4．座机电话号码，5 4．5 作流动相，电感耦合等离子体质谱 ICP-MS 检测， pm ，使用5mmol／L的柠檬酸溶液 pH 5， 在21min内可以完全分离5种硒形态。各形态硒的线性相关系数均大于0．999 SeVl、SeW、SeMet、SeCys2、 SeEt的检出限分别为0．4、0．4、5．6、0．9、1．2鹏／L。探讨了不同提取方法的提取效果，鲜蘑菇和猪肉样品加标回收 实验表明，对水溶性良好的无机硒和硒代蛋氨酸而言，采用柠檬酸溶液提取的效果非常好，SeW和SeVI的回收率 围内。该方法可完全满足食品中这5种硒形态的准确定量分析。 关键词：高效液相色谱；电感耦合等离子体质谱；硒化合物 基金项目：深圳出入境检验检疫局科研项目 课题编号：2006SZKll 。 硒是人体必需的14种微量元素之一，具有保护心脏、抗肝坏死、解毒、提高免疫力、延缓衰老等多种 药理作用，被誉为“生命火种”、“心脏的守护神”和“抗癌之王”。但硒也是典犁的双功能元素【】J，无机硒含硒量 高、价格低廉，但吸收和利用不很理想，最重要的是毒性大，日本、美国等发达国家早已禁止在食品中添加 亚硒酸钠等无机硒。有机硒含硒鼍低、价格高，生物利用率高，目前己被用作硒强化剂广泛应用到各种富硒 食品中。但食品中存在的硒形态可能会因生态环境或生产加工过程不同而发生变化，因此准确地定性定量分 析食品中的硒形态对食品安全具有重要的指导意义。 01，对硒形态的 面已有一些报道【3。J，但由于硒形态种类多，分离和提取难度大，目前国内多见综述性报道瞄‘1 实验研究报道很少。喻宏伟等【lI】采用反相离子对色谱，使用含七氟丁酸和甲醇的溶液做流动相分离了生物样 2J研究分离了尿样中的 5种形态，分离效果和定量结果均令人满意。 l 实验部分 1．1仪器与试剂 Waters 2695高效液相色谱仪，美国；X 科学研究院；硒代蛋氨酸 纯度 99％ 和硒代胱氨酸 纯度98％ ，Acrosorganics公司；硒代乙硫氨酸 纯 度98％ ，TRC公司。SeMet用去离子水溶解配制成100 201l食品安全技术与标准国际研讨会暨AOAC中国区会议论文集 入l也滴稀盐酸 分别配制成100 SeEt 100甥几的混合标准工作液。 1．2仪器条件 mmx4．6mill，5 1．2．1色谱条件HamiltonPI冲X．100色谱柱 250 mmol／L柠檬酸溶 Inn ；流动相为5 4．5，20％氨水调节 ，流速1．2mL／min，进样量100止。 液 pH 1．2．2 ICP．MS参数功率：1400W；冷却气流速：14．0L／rain；辅助气流速：0．8L／rain；雾化气流速：0．85 L／rain；H2／He混合气流速：5．8mL／min；H2／He混合气比例：3：97。 1．3样品前处理 1．3．1酸提取样品购自市内超市，猪肉洗净后取精肉部分粉碎，鲜蘑菇洗净后直接粉碎。称取1．09匀 000 质样品，加入5mmol／L的柠檬酸溶液20mL，70℃恒温水浴振荡过夜，3 r／min离心，过0．45岬滤膜，待 测。同样方法做试剂空白。 1．3．2酶水解提取同上将样品粉碎后，称取1．0 mL水，37℃ g匀质样品，加入20mg蛋白酶K，再加入20 水浴振荡4h，3000 r／min离心，过0．45“m滤膜，待测。同样方法做试剂空白。 2结果与讨论 2．1流动相的选择 在硒的形态分析中常用到三氟乙酸、五氟丙酸和七氟丁酸等全氟羧酸【玉¨l，或者添加烷基磺酸钠、氢氧 化四甲基铵等离子对试剂作为流动相成分161，也有加入少量甲醇等有机溶剂来提高有机硒的分离效果…J。考 虑到应尽量采用简单和无毒试剂作为流动相，并结合各种硒形态在水溶液中的离子化状态，本实验选择了乙 酸铵、磷酸二氢铵、柠檬酸等弱酸盐溶液作为流动相进行分离。实验发现使用乙酸铵溶液无法将几种形态硒 进行良好分离，5种硒形态只检测到3个色谱峰；使用磷酸二氢铵溶液作为流动相，5种硒形态可完全分离， 但SeVI出峰时间在35 rain左右，且硒代蛋氨酸的响应信号很低 与文献[3】的报道相符 。为了提高检测效率， 缩短出峰时间，我们试验了改变磷酸二氢铵溶液的浓度和酸度，两种无机硒的保留时间变化很大，甚至与硒 代氨基酸的峰发生重叠，但是在优化的分离条件下，不仅硒