APOBEC3G真核表达载体构建和抗HBV复制的初步研究_汤仁仙.pdfVIP

12 10 SUZHOU UVIVERSITY JOURNAL OF MEDICAL SCIENCE 20 10 ; 30 ( 6) · · 方法与技术 APOBEC3G 真核表达载体构建及抗 HBV 复制的初步研究 ， ， ， ， ， ， 汤仁仙 甘宜敏 孔凡运 尤红娟 史 震 胡丽娜 郑葵阳 ( ， 221002) 徐州医学 院 病原生物与免疫学教研室 江苏徐州 : B mRNA 3G( APOBEC3G) ， 摘要 目的 构建人载脂蛋白 编辑酶催化多肽样蛋白 真核表达载体 并探讨其抗 乙 型肝炎病毒( HBV) 复制 的作用。方法 采用 RT-PCR 法从健康人外周血单个核细胞中克 隆 APOBEC3G 基 因编码 ， pcDNA3． 1-A3G ， pcDNA3． 1-A3G HepG2 ． 2 ． 15 ， 区片段 构建 真核表达载体 利用脂质体转染法将 转染 细胞 分别于转 染后第 24 、48 、72 h 收集细胞培养上清液和细胞总蛋白 ，Western blot 检测 HBx 蛋白表达情况 ，ELISA 法检测细胞上 清液 中 HBsAg 和 HBeAg 表达情况 。结果 测序结果显示 pcDNA3． 1-A3G 真核表达载体 中 APOBEC3G 编码 区序列 1 ; HepG2 ． 2 ． 15 APOBEC3G ，HBx 、HBsAg HBeAg ， 72 存在 处碱基 同义突变 细胞经 蛋白干扰后 和 表达量逐渐降低 于 h 表达量显 著降低 。结论 成 功构建 了 APOBEC3G 真核表达 载体 pcDNA3． 1-A3G; APOBEC3G 在体外 可 以抑制 HBV ， APOBEC3G HBV 。 复制 为深入研究 作为抗 药物提供了实验基础 关键词: 人载脂蛋白 B mRNA 编辑酶催化多肽样蛋白 3G; 真核表达载体; 乙型肝炎病毒; HepG2 ． 2 ． 15 细胞 中图分类号: R373． 2 + 1 文献标识码: A 文章编号: 1673 － 0399( 2010) 06 － 1210 － 04 Construction of Eukaryotic Expressional Vectors of APOBEC3G and the Study of Its Role Against HBV TANG Ren-xian ，GAN Yi-min ，KONG Fan-yun ，YOU Hong -j uan ，SHI Zhen ，H U Li-na ，ZHENG Kui-yang ( Dept of Pathogen Biology