p21活化蛋白激酶2在卵母细胞成熟中作用.pdfVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００７，２７（６）：２７～３０ ｐ２１活化蛋白激酶２在卵母细胞成熟中的作用 １，２ １，３ １ 程大也 　梁　彬 　李　丰 （１中国医科大学细胞生物学卫生部重点实验室　２中国医科大学附属第一医院输血科 ３中国医科大学高等职业技术学院　沈阳　１１０００１） 摘要　研究ｐ２１活化蛋白激酶２（ｐ２１ａｃｔｉｖａｔｅｄｋｉｎａｓｅ２，ＰＡＫ２）在爪蟾卵母细胞成熟中的作用。 ? 利用特异性抑制ＰＡＫ２活性的ＰＡＫ２Ｎ端（ＰＡＫ２Ｎｔｅｒｍｉｎａｌ，ＰＡＫ２ＮＴ）片段显微注射爪蟾卵母细 ? ? ? 胞。荧光显微镜下比较ＰＡＫ２ＮＴｍＲＮＡ注射组和未注射对照组卵母细胞胚泡破裂发生。共聚焦 ? 显微镜下，时间延迟摄影法观察两组卵母细胞胞质分裂过程中肌动蛋白和纺锤体的变化。与未 注射ＰＡＫ２Ｎ端ｍＲＮＡ的对照组卵母细胞相比，注射组卵母细胞胚泡破裂发生无异常，但未见胞 ? 质分裂发生和极体形成。结果提示ＰＡＫ２可能参与爪蟾卵母细胞胞质分裂过程。 关键词　ｐ２１活化蛋白激酶　卵母细胞　胞质分裂 中图分类号　Ｒ３２９．２＋８ 　　ｐ２１活化蛋白激酶（ｐ２１ａｃｔｉｖａｔｅｄｋｉｎａｓｅ，ＰＡＫ）是 ? １　材料与方法 Ｒｈｏ家族中ＧＴＰ酶的重要效应物，它在细胞形态学和 动力学以及细胞转化，细胞分裂的调控方面起到很重 １．１　材　料 要的作用。ＰＡＫｓ分为两个亚类。第一个亚类包括 　　非洲爪蟾；ＰＣＳ２ＨＡＰＡＫ２Ｎ端片段（ＰＣＳ２ＨＡ ? ? ? ? ? ＰＡＫ１（ＰＡＫ）、ＰＡＫ２（ＰＡＫ）、ＰＡＫ３（ＰＡＫ），其催化区 ＰＡＫ２Ｎｔｅｒｍｉｎａｌ，ＰＣＳ２ＨＡＰＡＫ２ＮＴ是把ＰＡＫ２Ｎ端 α γ β ? ? ? ? ? 域有８０％～９０％的序列同源性。第二亚类包括ＰＡＫ４、 片段构建成质粒，编码ＰＡＫ２Ｎ端１～２１７位氨基酸）由 ＰＡＫ５和ＰＡＫ６，它们之间关系密切，但和第一亚类的催 加拿大渥太华大学 ＣＩＶＩＣ医院惠赠；标记 Ｆ肌动蛋白 ? ［１］ 化区域序列同源性只有４０％～５０％ 。 的Ａｌｅｘａ４８８次毒蕈环肽（Ａｌｅｘａ４８８ｐｈａｌｌｏｉｄｉｎ）和标 ? ? ? ? 　　有研究表明ＰＡＫ１重组的激酶活性区域诱导细胞 记微管的罗丹明 微管蛋白（Ｒｈｏｄａｍｉｎｅｔｕｂｕｌｉｎ）购自 ? ? ［２］ Ｇ２／Ｍ期转换的停滞 ，ＰＡＫ１与ＰＡＫ２的激酶区域是 Ｍｏｌｅｃｕｌａｒｐｒｏｂｅｓ公司；体外合成 ｍＲＮＡ试剂盒购 自 高度保守的序列，相似度达到８５％，并且都是Ｃｄｃ４２的 Ａｍｂｉｏｎ公司；抗ＨＡ抗体购自ＳａｎｔａＣｒｕｚ公司；限制性 重要的下游效应器，ＰＡＫ２是否在Ｇ２／Ｍ期的转换中也 内切酶购自Ｐｒｏｍｅｇａ公司；胶原酶购自Ｓｉｇｍａ公司。