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第五章 细胞化学成分的分离 第二节 动物细胞基因组DNA 的提取 专业：生物物理学 姓名： 贺 丽 学号 提取DNA 的一般步骤 破碎组织或细胞 提取DNA 纯化 动物细胞基因组DNA 的提取 DNA 的提取方法 SDS ／酚法提取基因组DNA原理及步骤 试剂盒法提取基因组DNA原理及步骤 基因组DNA 的浓度及纯度检测 实验过程中的注意事项 DNA 的提取方法 浓盐法 透析法 SDS ／酚法提取基因组DNA 试剂盒法 SDS ／酚法提取基因组DNA 实验原理 表面活性物质SDS裂解细胞，酚使 游离出来的蛋白质变性，从而与水溶 性DNA分离。 实验流程图 SDS、蛋白酶K、 酚/氯仿/异 EDTA、盐 戊醇抽提 水相DNA 离心取上清 细胞的 中间层（变性蛋白） 悬浮液 酚相 裂解细胞降 蛋白质变化 解蛋白质 提取DNA 溶解DNA 乙醇沉淀乙醇沉淀 同一方向 轻轻旋转 溶纯化DNA 沉淀DNA 试剂盒法的实验原理 利用细胞裂解液裂解细胞核释放基 因组DNA ，由硅胶膜柱可逆吸附基 因组DNA ，经蛋白酶消化、漂洗液 清洗除去蛋白质、脂质以及多糖等 杂质后，用漂洗液洗脱获得基因组 DNA 。 实验样品预处理 细胞： 6 7 取1×10 －1 ×10 个悬浮培养细 胞，12000rpm离心1min后收集细胞； 贴壁细胞先用胰酶消化处理，再用预 冷的PBS吹打成细胞悬浮液，然后 12000rpm离心1min后收集细胞。尽量 去除上清液，加200ul溶液A ，振荡至 彻底悬浮。 组织： 组织量不宜太大，一般不要超过 25mg ，研磨成粉末状，再用预冷的 PBS或无菌水充分悬浮，然后 12000rpm离心1min，尽量去除上清， 加200ul溶液A ，振荡至彻底悬浮。 实验流程图 不同的试剂盒具体 的实验步骤是不一 样的，但总的实验 过程是基本一样的。 基因组DNA 的浓度及纯度检测 回收得到的DNA 片段可用琼脂糖凝胶电泳 和紫外分光光度计检测浓度与纯度。 OD260/OD280 比值应为1.8–2.0之间。 基因组DNA 电泳图 实验过程中的注意事项 生物样品要防止污染，以免混入其 他来源的DNA 。 样品越新鲜提取的DNA质量越好。不 能立刻提取基因组DNA 的实验材料应 尽快置于液氮或-70℃冰箱中保存并避 免反复冻融。 实验的成功与否，关键步骤是蛋白 酶K消化要好，否则蛋白质不易去除， 且DNA得率低。 整个实验过程中动作要轻，防止猛 烈振动使DNA断裂。 THANK YOU FOR YO