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蚓激酶基因的克隆与序列分析 黎明 赵明明 杜连祥 韩振林 (天津科技大学生物工程学院 天津市工业微生物重点实验室 天津 300222) 摘 要：本文采用TRIZOL试剂从蚯蚓体内提取总RNA，以Random9mers为引物反转录 合成cDNA第一链，根据GeneBank上已发表的蚓激酶5’和3’末端保守序列设计引物，用PCR 技术扩增到一条750bp左右的蚓激酶基因，并将其克隆到pUCm-T载体进行测序。利用生物信 息学进行蛋白质构象预测，结果表明蚓激酶属酸性蛋白质、丝氨酸蛋白酶，含有丝氨酸活性中 心，其蛋白质二级结构主要由0折叠构成。 关键词：蚓激酶；RT-PCR；克隆；序列分析 and ofLumbrokinaseGene CloningSequenceAnalysis Li Zhao Du HanZhenlin Ming MingmingLianxiang LabofIndustrial of BioengineeringTianjin (TianjinKey Microbiology，College ofScienceand 300222) University TechnologyTianjin 7 based5’and3 conservativeterminal thathad Abstract：Primerswere on sequences designed been in entire oflumbrokinasewas RT-PCR GeneBank．Thecodingsequence amplifiedby reported into fromthetotalRNAofearthworm，thenthe wasinserted vector，trans- sequence pUCm-T formedintoE．coliJMl09and totheacidic prote— sequenced．Lumbrokinasebelongs protein，serine ase．Conformationindicatesthatits structureconsistsof prediction secondary mainly 0-sheet． Keywords：lumbrokinase；RT-PCR；cloning；sequenceanalysis 血栓病是严重危害人类健康的常见病、多发病，尤其在一些较为发达的国家和地区，人 们长期饮食结构不合理，高蛋白、高脂肪的摄取以及吸烟、酗酒都加重了这种疾病的流行， 严重地威胁着人们的身体健康和生命安全。据世界卫生组织统计，全世界每年心血管病死亡 人数约1300万，仅美国急性心肌梗死人数就有150万，约1／3致命，占美国疾病总死亡率 的30％。卫生部统计资料表明，每年我国死于心脑血管疾病的人数超过200万，发病人数 超过20000万。近年发现40岁以下人群发病率比5年前增加6倍，这是个巨大的数字。因 此，寻找一种原料来源丰富、治疗效果显著且无毒副作用的溶栓新药已成为当务之急。