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尿液淀粉酶活力测定实验.ppt
实验十五 尿液淀粉酶活力测定 （Winslow）氏法 原理： 临床上通常用Winslow氏法测定尿或血清中淀粉酶活性。该法对淀粉酶活性单位的规定是：在37℃，30分钟，恰好能将0.1%淀粉溶液1m1水解（指加入碘液后不再呈兰色或红色）的酶量定为一个活力单位。 试剂与器材： 1.0.9%NaC1； 2.0.1%淀粉； 3.碘化钾一碘溶液（20KI和10g碘溶于100m1水中，使用前稀释10倍）； 4.移液管； 5.试管； 6.恒温水溶锅。 操作： 1.取10支试管，按次序记上号码，各加0.9% NaCl 1 m1。 2.用1m1移液管加尿液1m1于第一管，使其与0.9%；NaC1混合（若尿液中含淀粉酶过多，应预先将尿液适当稀释）。用移液管吸取，然后任其流出。反复三次，使全管混匀。 从第一管吸出1m1到第二管中，混匀。吸出1m1到第三管……依次类推。到第九管吸出1m1弃之。这样即可获得分别含 有尿液1/2、1/4、1/8……1/512 m1的不同浓度的尿稀释液，第10管不加尿液作为对照管。 3.将10支试管置冰水溶中，然后从第10管起依次迅速准确加入0.1%淀粉液1m1。迅速摇匀。立即从冰水浴中取出，置37℃，并记录时间。注意保持水浴的温度。 4.保温30分钟后，取出各管。迅速浸入冰水浴中冷却。然后向各管中加稀碘液2滴摇匀。观察各管的颜色。各试管中出现黄到兰的色序。黄色表明无淀粉存在，浅红色到紫色表明有淀粉的水解中间产物。兰色表明有淀粉或其初期水解产物存在。 计算：选择黄色管中尿液稀释倍数最大的一管来计算。假设第5管为黄色（从第6管起仍有红色或兰色）。已知第5管内含尿液为1/32m1。即1/32m1尿液能在37℃，30分钟水解0.1%淀粉1 m1。所以，1 m1尿液在同样条件下可水解0.1%淀粉32 m1。即每1 m1尿液中所含淀粉酶的活性为32个活力单位。 * * *
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