血清总蛋白测定.pptVIP

血清总蛋白测定 双缩脲法 实验目的 熟悉血清蛋白的测定方法（双缩脲法）。 掌握血清总蛋白测定的临床意义。 进一步巩固掌握721E型分光光度计的使用。 实验原理 尿素被加热，则两分子的尿素放出一分子氨而形成双缩脲。双缩脲在碱性环境中，能与硫酸铜结合成紫色的化合物，此反应称为双缩脲反应。 蛋白质分子中含有肽键与缩脲结构相似，故也能进行此反应。双缩脲反应可作为蛋白质定量测定的依据。 双缩脲反应并非是蛋白质特有的颜色反映！ 凡分子内含有2个或2个以上甲酰基氨基（-CONH2-）均可呈双缩脲反映。 实验试剂 生理盐水：NaCl 0.9g 溶于100ml蒸馏水 双缩脲试剂：硫酸铜 3.0g溶于500ml蒸馏水，加酒石酸钾钠9.0g,碘化钾5.0g，完全溶解后，加入24%NaOH100ml，用蒸馏水稀释到1L，置聚氯乙烯瓶内盖紧保存。 蛋白质标准液：收集混合血清，经凯氏定氮法定值，用作蛋白质标准液。贮于冰箱中备用。也可用100mg/ml牛血清白蛋白替代。 待测血清用生理盐水1:10稀释。 实验操作 取3支试管，按下表操作。 混匀，37℃水浴放置10分钟，以空白管调零点，在540nm波长处进行比色，分别读取各管的吸光度。 计算（P60） 临床意义 血清蛋白升高 血清蛋白降低 * * — — 1.00 5.0 — 1.00 — 5.0 1.00 — — 5.0 血清（ml） 蛋白质标准液（ml） 生理盐水（ml） 双缩脲试剂（ml） 空白管 标准管 测定管