肠露灌肠剂治疗小鼠免疫性溃疡性结肠炎的实验的研究.pdfVIP

肠露灌肠剂治疗小鼠免疫性溃疡性结肠炎的实验研究 吴耀南1 肖玉琴1 陈一斌1 王文凡1涂志红1王瑞幸2黄自强2 1福建中医学院附属厦门市中医院厦门(361001) 2福建医科大学福州(350001) 我们用中药制剂肠露保留灌肠在临床上治疗UC取得良好疗效，为了进一步研究其疗效作用， 我们用免疫学致敏法成功制作实验小鼠UC模型，并对其进行肠露保留灌肠剂高、低两个剂量组治 疗作用的药效学等观察，报告如下： l材料与方法 1．1材料 1．1．1 药品肠露(补骨脂、黄芪、丹参、鬼针草等组成)，每毫升含生药O．759，厦门市中医 公司，批号200304C04；联苯胺，上海崇明县裕西试剂厂，CR；总蛋白定量测试盒(比色法)，购 自南京建成生物工程研究所。 均由福建医科大学实验动物中心提供。 1．1．3仪器UV．120紫外可见光光度计，北京瑞利分析仪器公司：80．2型离心机，上海手术器 ElectricBiomedical公司。 1．2方法 1．2．1 分组小鼠50只随机分为5组，每组lO只；组l为正常对照组，组2为UC模型组， 组3为柳氮磺吡啶(SASP)组，组4为肠露高剂量组，组5为肠露低剂量组。 1．2．2抗原制备参照《药理实验方法学》等，将家兔处死，取其结肠粘膜，加入适量生理盐 水，4℃下用超声波细胞粉碎仪(功率400W，超声时间2s，间隔时间5s，50次)制成组织匀浆， 使用时加入等量Freund’s完全佐剂，制成抗原乳化液。 1．2．3 UC模型制作 参照文献加以改进造模。首先每只小鼠于左侧足垫内注射含2mg抗原的 抗原乳化液，然后在d8于右侧足垫、d15于腹腔、d22于背部各再注射一次(末次注射不加佐剂)。 用生理盐水洗净，再用不加佐剂抗原液2mg(0．2m1)留置灌肠2小时。然后再用生理盐水洗净。除 正常对照组小鼠(组1)外，其余各组小鼠均按上法造模。小鼠每天给予足量(89／只)颗粒饲料， 饮水不限制。 1．23治疗于造模术后2日开始给药，连续21日：第3、4组分别给予肠露灌肠和灌胃各 质量，每日1次；第l、2组给予生理盐水灌肠和灌胃各3ml／1009体质量，每日1次，分别做为正 常对照组和模型对照组。 1．3观测指标 HS等的方法并加以改进，于造模术后第2、9、16以 1．3．1疾病活动指数(DAI)参照Cooper ．．一280．．一 及23日测小鼠的体质量、观察大便性状和隐血情况，按表1标准进行评分。将体质量下降、大便性 状和隐血情况的分值相加，得出每只小鼠的DAI，即DAI=(体质量下降分数+大便性状分数+便 血分数)，以评估疾病活动情况。 表1 DAI评分标准表f5I ·正常大便指成形颗粒样便；半稀便指糊状或半成形不粘肛便：稀便指水样粘肛便 1．3．2体质量变化及结肠炎症反应情况各组小鼠于造模术前、造模术后2日各称体质量1次， 造模术后23日称体质量后处死小鼠，取全段结肠，沿肠系膜剖开结肠，生理盐水洗净，测量全结肠 长度，滤纸吸干后，用BP221S微量称重仪(德国)测结肠湿质量，按下式计算肠重指数。 肠重指数=j型婴×100％ 怜腴萤 1．3．3结肠组织病理学检查各组取病变最明显处结肠段lent，10％甲醛固定，常规石蜡切片， HE染色和光镜检查。 1．4统计学处理采用SPSSl1．0统计软件对上述检查结果进行分析处理，计量资料用均数±标 准差(x±s)表示，组间均数的比较采用t检验。 2结果 2．1 各组小鼠疾病活动指数(DAI)评分结果见表2。 表2各组小鼠DAI评分(x±s) 与组2比较，·P0．05：··PO．01：奉¨P0．001。(下表同) 肠露均明显减轻UC小鼠的疾病活动指数。 2．2各组小鼠体重变化、结肠炎症反应情况分别见表3、表4。 ．．．．．281．．．．． 表3各组小鼠体质量变化 从表3可见，术后23天，治疗组小鼠体质量增长有所改善，柳氮磺吡啶组、肠露高、低剂量组 小鼠食欲和促进体重恢复的作用。