HGF基因促进大鼠血管内皮细胞增殖的体外的研究.pdfVIP

血管外科实验研究{D() 4．讨论 血管生成作用，更是引起了人们高度重视。 (1)干细胞治疗的意义：近年来干细胞治疗缺血性疾病成 基因治疗的关键因素之一是基因传释的载体．它是将目的 为了热点，利用干细胞的可塑性，人们称之为。百变金刚’将 基因转运到患者体内靶细胞的工具。一般分为病毒载体和非病 其移植于缺血的组织中．使其分化为血管内皮细胞从而达到新 毒载体两太粪。病毒载体转染效率高，但存在操作复杂和一些 生毛细血管的作用，一直以来是该项治疗的依据。古代有自血 安全性忧虑，从而限制了其『临床广泛应用。裸露DNA作为一 疗法，而近6年来心机梗塞、下肢缺血领域的应用也均有一定 种新型的基因转移载体近年来已受到人们的广泛关注．被认为 的效果，且术中木后又没有较严重的并发症。移植后近期或者 是比较安全、方便的转移形式，能够象常规药物一样应用，如 远期对病人的症状礴有一定的缓解作用。这对无输出道，元血 肌肉注射。奉研究的且的是构建一种携带人肝细胞生长因子基 管搭桥条件而又面临肢体严重缺血的病人来说不失为一个可尝 因的表达载体．并对其活性进行研究，可望为体内缺血性疾病 试的方法。 的治疗提供一种可供选择的新的治疗手段。 (2)千细胞是具有分化潜能的细胞，它可分化成各种组 材料和方法 Liu 织，干细胞分化成血管内皮细胞后可进一步形成毛细血管。骨 1材料：pcDNA3、面MV—HC．F质粒由Yo．dmaPhi)惠 髓来源的内皮祖细胞是由外周血中的单个核细胞分裂而来的。 赠。pEGFP—CI由浦佩玉教授惠赠。限制性核酸内切酶B蛐m、 并可分化成新生的血管，以往骨髓暴露治疗血栓闭塞脉管炎的 涮、E积V，x—HindⅢ、DI舢及DLl5000DN^Mn妇购 疗法曾有许多学者应用于临床且有一定效果，相比较而言通过 自大连宝生物公司。大肠杆菌DH5a为天为时代公司产品。 TaKaBa GelDNA DNA 动员分离出单个核细胞并用于治疗下肢缺血性疾病，应该有其 A鲫0ee nⅡiI跏∞Kit协．2．0，TaKaRaIj单． 广阔的治疗前景。 妇Kit，T面酶，椰，琼脂糖购白大连宝生物公司。质粒小 (3)治疗四步曲：动员期应用，应用集落细胞刺激因子3量提取试剂盒购自天为时代公司。wistar大鼠购白中国军事医 —5天使骨髓造血中枢中单个棱细胞增加到一定程度并促使其 学科学院；高糖型D删、RPMIl640培养基(GmCOBRL公 释放人外周血中；采集期，每次应用血细胞分离仪，体外 司)，胎牛血清(天津盛达科技公司公司)。青霉寨和链霉素 】00nd，血液循环过滤约4—6个小时，严密观察病人舶反映， 并及时给病人补充液体及钙剂；移植期。采用缺血局部间断肌 内注射，并通过患肢股动脉注射两种方式，是单个核细胞渡经 人八因子相关抗原(FaVII)、F1TC标记抗兔I击抗体、Pv法免 血管分散于众多的患肢毛细血管中，充分发挥作用；恢复期， 疫组织化学试剂盒、DAB显色试剂盒(北京中杉金桥科技有限 配合应用扩张血管改善血运，及补气活血类药物将有助于干细 HGFELISA 胞在缺血组织中生长分化成毛细血管。 试齐j盎(武投博士德)。 cD- (4)治疗效果的观察：中医中药理论被人们称之为。黑箱 2质粒构建：首先，用BaⅢHI单酶切的方法将HGF 理论”，中医治病也有些人称之为“黑箱教应”。而目前干细胞