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一、实验课程的性质和目的 生物化学是一门实验性学科，其所有的知识均来源于实验。生物化学实验教学是生物化学教学的重要组成部分，因此，生物化学实验课是医本科生的重要必修课之一，是其它医学各科的重要基础。 【目的要求】 1．掌握生化实验的基本操作技术。玻璃仪器的洗涤 2．掌握吸量管、移液器的使用 3．掌握试管中液体的混匀法 4．掌握分光光度法原理及分光光度计的使用 5．学习用考马斯亮蓝染色法来测定蛋白质含量的原理及方法 6．了解常见的测定蛋白质含量的方法 【实验时数】3学时 【实验内容】 1. 介绍玻璃仪器的洗涤、吸量管、移液器的使用、试管中液体的混匀法 2. 讲述分光光度法原理及分光光度计的使用方法 3. 标准曲线绘制 4. 样本蛋白含量的测定 【实验方法】 1．示教吸量管、移液器的使用及分光光度计的使用方法 2．以标准曲线法进行血清蛋白含量的测定 实验二 (1)血清蛋白电泳 (2)蛋白质等电点测定 【目的要求】 1．学习并掌握醋酸纤维薄膜电泳的原理及操作。 2．了解如何测定人血清中各种蛋白质的相对百分含量。 3．． 【实验时数】3学时 【实验内容】 1.电泳前准备 2.电泳 3.染色及漂洗 4．配制不同pH的缓冲溶液 5．观察酪蛋白在不同的pH缓冲溶液中的沉淀量 【实验方法】 1．以醋酸纤维薄膜对血清蛋白进行电泳分离 2．沉淀法测定酪蛋白的等电点 实验三 分子筛层析（凝胶过滤） 【目的要求】 熟悉Sephadex分子筛层析的原理及基本方法 【实验时数】3学时 【实验内容】 1．2．3． 4．5．Sephadex凝胶过滤法分离兰色葡聚糖和重铬酸钾 实验四 碱性磷酸酶活力测定 【目的要求】 1．掌握酶活力测定的基本方法，加深对酶的激活与抑制的理解。 2．熟悉酶活力单位、总酶活力、酶的比活力的含义及计算方法。 【实验时数】3学时 【实验内容】 1．标准曲线制作 2． 【实验方法】 标准曲线法测定碱性磷酸酶的活力 实验五 (1)乳酸脱氢酶及辅酶的作用 (2)细胞色素体系的作用及其抑制 【目的要求】 1．掌握乳酸脱氢酶及辅酶的作用 2．了解粗制乳酸脱氢酶酶蛋白及辅酶的提取方法 3．掌握细胞色素体系的作用及氰化物对细胞色素氧化酶的抑制作用 【实验时数】3学时 【实验内容】 1．2．NAD+3．4．． 2．了解酶的最适pH的实验设计方法 【实验时数】3学时 【实验内容】 1．．1．2．1.实验原理 2.操作：．．1.实验原理2.操作：(ALT)活性的测定 (2) 尿酮体定性检验 (3) 尿蛋白定性检验 【目的要求】 1．熟悉血清丙氨酸氨基转移酶活性测定的方法。 2．掌握血清丙氨酸氨基转移酶活性测定的临床意义。 3．熟悉尿酮体测定的方法。 4．掌握尿酮体测定的临床意义。 5．熟悉尿蛋白测定的方法及临床意义。 【实验时数】3学时 【实验内容】 1．标准曲线绘制： 2．样品ALT活性测定 3．尿液酮体的检测 4．尿蛋白的检测 【实验方法】 1．赖氏法测定血清ALT活力 2．亚硝基铁氰化钠法测定尿酮体 3．加热醋酸法测定尿蛋白