微生物致病性弧菌检测科标检测.docVIP

微生物致病性弧菌检测 一、概述 1995年《美国临床微生物手册》第六版明确了弧菌属的致病菌为12种，O1型霍乱弧菌、O139型霍乱弧菌、拟态弧菌、河弧菌、副溶血性菌、霍利斯性菌、溶藻弧菌、弗尼斯菌、创伤弧菌、麦契尼可夫弧菌、海鱼弧菌、辛辛那提菌、鲨鱼弧菌。 12种致病性弧菌的致病性差别较大，所致疾病的种类和毒性差别较大。在这12种致病菌中，最重要的，也是出问题最多的是O1型霍乱弧菌、非O1型霍乱弧菌、副溶血弧菌和创伤弧菌。国内外均是如此。美国FDA在“食品微生物控制”中特别强调了这四种菌，欧洲的NMKL也对这四种菌提出了特别要求，并有专门方法NMKL No.156颁布。 青岛科标检测研究院紧跟行业需求，依据国家及国际标准，依靠先进的技术和设备为客户提供全方位各种微生物检测相关服务。 二、致病性弧菌的控制 弧菌和其它G-菌一样，是嗜温型菌，生长需较高的温度，高水活度，中性pH。与其它不一样的是，生长需要盐，故而十分耐盐，但轻微热处理很易将其杀灭。 　　蒸煮控制，防止二次污染，防止时间/温度控制不当（注意冷藏），控制产品来源。? 三、致病性弧菌的检测方法 1、具有代表性检验方法简介 （1）、FDA的细菌学分析手册 　　霍乱、付弧、创伤弧菌和其他弧菌（1995 1998修订）分别着重介绍了霍乱弧菌、副溶血弧菌、创伤弧菌的方法。 　　用PCR方法检测产肠毒素的霍乱弧菌叙述了霍乱肠毒素（cholera Toxin (T)基因 （2）、AOAC官方分析方法 　　牡蛎中的霍乱弧菌：升温富集法（1995.a） 　　创伤弧菌的脂肪酸气相色谱鉴定法（AOAC.1995.b） 　　美国midi公司生产的shelock微生物鉴定系统。 （3）、ISO方法 　　副溶血弧菌的检测方法（ISO8914：1990E） （4）、NMKL 　　食品中致病性弧菌的检测和计数（NMKL N0156）介绍了霍乱弧菌、副溶血弧菌、创伤弧菌、溶藻弧菌的检测程序。 （5）、不同国家的方法 　　日本、瑞士等国均有相应检验方法。 2、致病性弧菌的检测方法 以上介绍的方法均是以单一或少数目标菌（NMKL为四种）为目的的设计的程序。鉴于国外对出口食品中多种致病性弧菌的要求和重视，有必要探讨“同一程序同时检测多种弧菌”方法。 　　【检验程序】 　　25g样品+225mL APW(1% NacL pH9.0) 增菌?↓37℃8-16h 取10mL加入双倍APW ↓37℃6-8h 选择?选择培养基 TCBS （霍利斯用非选择性的羊血球琼脂） ↓37℃24h 定弧菌?取黄色或绿色菌落做G染色、氧化酶、动力、 ↓ O/129(150ug)、D-甘露糖 分组 初步鉴定：0% NacL , 1% NacL、硝酸盐还原、精氨酸双水解酶、赖氨酸脱羧、鸟氨酸脱羧、 （氧化酶）分成5组 ↓ 确证?最后鉴定 青岛科标检测研究院