骆驼蓬植物ISSR-PCR反应体系的建立和优化.pdfVIP

m嘶№喇黼∞洲籼洲酬触黼悯训悯眦溜寺壁’ 全一纂9囊天慧筠囊资葺拳术研讨会。历^蔫 骆驼蓬植物ISSR—PCR反应体系的建立与优化 Oil harmalaLinn．ISSR-PCRReaction StudyPeganum System 赵鑫1，凯撒．苏来曼舢，阿依别克2 (I．舢E／农业大学，辽宁沈阳110161；2．新疆中药民族药研究所，新疆鸟鲁木齐830002) 摘要 TaqDNA聚合酶、 果：适于骆驼蓬ISSR--PCR反应体系为25ul总体积中内含IxPCR反应缓冲液(Mg矗}ee)、1．5U 0．6mmol／LDNPS、0．6vmoFL 骆驼蓬种质资源和遗传多棒l勤开究奠定了基础。 关键词骆驼蓬；ISSR-PCR 骆驼蓬为蒺藜科植物骆驼蓬属多年生草本植物的全草，也是西北地区常见中药。本品性平，味 苦，辛，有毒，它有坚固筋脉、助阳暖阴、消除粘稠体液，消散寒湿之气等功能。 近年来ISSR已广泛应用于品种鉴定、种质资源和遗传多样性研究等领域。本研究采用单因素 试验法，对体系中的各因素进行筛选，建立了新疆骆驼篷植物的ISSR反应体系，为研究新疆骆驼 篷的遗传多样性奠定基础。 l材料与方法 1．1材料 将骆驼篷子种子播于穴盘萌发幼苗，待幼苗长出两片真叶时取样，液氮冷冻后于．80℃保存，待 用。骆驼篷子种子由新疆中药民族药研究所凯撒·苏来曼研究员提供。 1．2实验方法 1．2．1基因组DNA的提取及DNA质量检测 的纯度和浓度用紫外分光光度计法测定，并将DNA浓度稀释到20ng／vL，于．20C保存备用。 1．2．2 ISSR引物 析体系的建立与优化。 1．2．3 ISSR扩增与体系优化设计 X 在骆驼蓬ISSR分析体系的初步建立中，PCR反应体积为25ul，内含1PCR反应缓冲液、 2．0mmol／L mmol／LdNTP、0．3 U MgCl2+、0．2 vmoUL引物、1．0 ng 总DNA。扩增程序为94℃3min，94℃45S，54℃lmin．72℃2rain，35次循环，72℃7min。从 引物浓度、dNTP浓度、M92+浓度和DNA聚合酶浓度等方面对骆驼篷ISSR分析体系进行优化。 ’基金项目 新疆维吾尔自治区重大科技专项“十一五”新疆少数民族医药现代化(200733146．1) 通讯作者凯撒·苏来曼研究员 从事药用植物研究E—mail：kaisa8000yahoo．corn．cn --——290--—— …3一。芝韶9等嚣；亍篇篇。。黼±■■■i*茴■盲■掌}■*☆■蝌 各因嘉水平见表 裹1影响[SSRPCR反应效果的各因蠢￡＆ 反应成分 攘度梯度 引物浓度Ⅶ∞VL 0．3 0．6 0．9 mHP旅度mmo儿0．40．6 n8 M业+蕺度m啪儿 1．0 I 5 2．0 TaqDNA聚台酶浓度U25／vL 0．5 1 0 I 5 1．2APCR扩增产物的杜刺 用古EB(0 5∥mL)的1．5％骧胎糖凝胶电泳检测扩增产物。在凝胶成像系统上观察电泳结果并 记录凝胶圈像。 2结果与分析 2l引物琅度对ISSR--PCR反应的影响 引物浓度对PCR的带型可产生显著影响。从图l可以看出，在各引物浓度下都