大豆叶绿体转化载体pJY系列的构建及其转化研究.pdfVIP

业生物技术学报 Journal of Agricultural Biotechnology 2006,14 (6): 899~904 ·研究论文· 大豆叶绿体转化载体pJY 系列的构建及其在烟草上的转化研究* 1 1,3 1 2 2 1 飒 , 李金耀 , 吴 平 , 孙 寰 , 赵丽梅 **, 寿惠霞 ** (1.浙江大学生命科学学院，杭州310029 ；2. 国家转基因植物中试与产业化基地，公主岭136100 ； 3.新疆大学生命科学学院，乌鲁木齐830046) ： 摘要 为解决杂交大豆( )制种过程中不育系易与保持系混杂的问题，开展了大豆叶绿体转基因的研究。通过转 基因方法在不育系的细胞质中植入筛选标记基因，以区分不育系和保持系。根据已发表的大豆叶绿体序列（GenBank X07675 ） ，用 设计引物 PCR 方法获得两段大豆叶绿体同源重组序列 和 ，克隆到质粒pUC19 中，并将来源于质粒pTF102 的壮观霉素抗性基因 克隆到两段同源重组序列之间，以构建大豆叶绿体转化表达载体pJY01。 基因的启动子 和终止子 基因3 序列，分别从烟 叶绿体基因组中扩增而来。在此基础上，将 丁膦抗性基因或绿色荧光蛋白与GUS 的融合蛋白基因克隆到该载体上，得到pJY03 与pJY04 ，并初步应用于烟 ( )的叶绿体转化，获得了具壮观霉 ， 基因的条带，并在激光共聚焦扫描下检测到GFP 的表达。 素抗性的绿色愈伤和幼苗 PCR 扩增出 ： ；表达载体； 关键词 大豆；叶绿体转化 GFP 中图分类号 S188 文献标识码 A 文章编号 1006-1304(2006)06-0899-06 : : : Construction of Soybean Chloroplast Transformation Vector pJY Series and Its Transformation in Tobacco 1 1,3 1 2 2 1 CHEN Sa , LI Jin-yao , WU Ping , SUN Huan , ZHAO Li-mei **, SHOU Hui-xia ** In order to eliminate the maintain-line seeds from the cytoplasm male sterile line seeds a selectable marker gene was inse