cDNA_AFLP技术在番茄及其黄化曲叶病毒互作中的应用_袁伟.pdfVIP

44 20 13 1 年第 期 : ， ， ， ． cDNA -AFLP ［J］． ，20 13 1 : 文献著录格式 袁伟 万红建 刘云飞 等 技术在番茄及其黄化曲叶病毒互作中的应用 浙江农业科学 44 － 47 ． cDNA-AFLP 技术在番茄及其黄化 曲叶病毒互作中的应用 1 ，2 1 1 1 1 ， ， ， ， 袁 伟 万红建 刘云飞 俞 锞 杨悦俭 1． ， 3 1002 1 ;2 ． ， 2 10095 浙江省农业科学院蔬菜研究所 浙江杭州 南京农业大学园艺学院 江苏南京 :cDNA -AFLP ， ， 摘 要 技术是研究基因差异表达的有利工具 广泛用于植物抗病 抗逆和生长发育等研究领 。 TYLCV ， TYLCV ， 域 番茄黄化曲叶病毒 是番茄生产上最严重的病害 为了研究番茄抗 机理 本研究利用 cDNA -AFLP ， 64 287 技术分析番茄抗黄化曲叶病毒病相关基因的差异表达 选用 对引物扩增筛选出 条转录差异片 ， 156 ，13 1 。 cDNA -AFLP TYLCV 段 其中 条上调表达 条下调表达 表明 技术对于揭示番茄与 互作机理是一种有效 ; TYLCV ， 。 的方法 同时获得的差异片段也可用于番茄抗 相关基因的克隆 为未来鉴定这些基因的功能奠定基础 : ; ; ;cDNA -AFLP 关键词 番茄 黄化曲叶病毒 差异表达 中图分类号:S 436. 4 1 文献标志码:B 文章编号:0528-90 17 20 13 0 1-0044 -04 ， ， 5 基因表达是遗传信息表现为生物性状的过程 子标记技术的快速发展 研究者已经鉴定了 种不 ， TYLCV ， Ty -1 ，Ty -2 ，Ty -3 ， 是按时间和空间顺序进行的 这种表达的方式称为 同抗 的基因 分别为 ［1］ ［13 － 17］ 基因的差异表达 。研究基因差异表达的方法很 Ty -4 和 Ty -5 ，其中 Ty -2 抗病基因被广泛应用 ， ， ， 。 TYLCV ， 多 如抑制消减杂交 电子克隆技术 基因芯片和 于育种实践之中 为了揭示番茄抗 的机理 cDNA -AFLP ［2］。 cDNA -AFLP cDNA -AFLP Ty -2 技术等 其中 技术由于 本文初步分析 技术在番茄 含有 ， ， ， TYLCV ， 其重复性高 假阳性低 操作方便快捷 可反映基 抗病基因 与 互作过程中的应用 筛选差 因间表达量的差异等优势被广泛应用在植物生物胁 异表达片段，为今后克隆与 Ty -2 基因相关基因奠 。 定基础。 迫和非生物胁迫等多个领域 目前许多研究者将该 ， 技术用于基因的差异表达分析 尤其在抗病相关基 ［3 － 5］ 1 材料与方法 因方面取得了较好的研究成果 。 番茄 Solanum lycop ersicum Mill ． 属于茄科 1. 1 材料 ［18］ ， 。 ， Banerjee 等 从多毛番茄 B1063 中选育得到 番茄属 是世界性的蔬菜作物之一 近年来 随着 ， TYLCV -H24 Ty -2 ， 番茄栽培面积的增加 番茄黄化曲叶病毒病 抗 的材料 含有 抗病基因 本 TYLCD 已经成为番茄生产中最严重的病害之 文使用经 H24 转育后获得的抗病材料07 -027 进行 。 ， 40 ， 一 据初步统计 至少有 个国家的番茄正遭受 实验研究 番茄植株生长于人工控制的气候室内 ［6］。 25 ℃ ， 18 ℃ 。 此类病害的毁灭 该病害首先在中国南方大面 白天 夜间 ， ， 1. 2 TYLCV 的接种 积爆发 自南向北发展 给我国的番茄产业带来了 ［7 － 11］。 4 ， TYLCV 毁灭性的灾害 该病害由番茄黄化曲叶病毒 当番茄材料长到 片真叶时 进行 的 TYLCV ， ， ， TYLCV D 0. 6 ～ 引起 一旦发病 会造成番茄大幅度减 接种 将带有 的农杆菌摇至 值为 ［12］ 。 1. 0 ， ， 产甚至绝收 接种部位为番茄茎段的韧皮部 接种量保持 ， TYLCV ， 300 L 。 目前 越来越多抗 的野生番茄被筛选 一致 每株 μ 菌液 ， 1. 3 RNA cDNA 出来 通过野生番茄与栽培番茄杂交可以将抗病基 总 的提取及双链 的合成 ， 。 0 ，7 ，14 ，2 1 ，28 ，35 d ， 因转入到栽培番茄 从而缓解病害的发展 随着分 分别于接种后 取样 收稿日期:20 12 -09 -2 1 : 3 107 1800 ; LQ12 C150020 ; 20 11C22007 基金项目 国家自然科学基金 浙