PCR-DGGE技术研究荣昌猪、长白、杜洛克猪肠道微生物群落多样性.pdfVIP

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PCR-DGGE技术研究荣昌猪、长白、杜洛克猪肠道微生物群落多样性.pdf

第十三次学术研讨会会议论文集 中,6个蛋白是已知的疫苗侯选抗原,24个蛋白是APP的新型免疫原性蛋白。根据Goure等的发现, AfuC、FatB、 在鉴定的新型免疫原性蛋白中,RbsB、IlvG、PrrA、CysG、Tt92D、FepB、HbpA、 Fl(pA的编码基凶在所有的血清型中均保守。这些保守的蛋白极有可能诱导全面的保护,有望作为疫 苗的候选体进一步深入研究。总之,鉴定的APP新型免疫原性蛋白单个或者组合的保护力均需要在 将来的实验研究中进行验证和评价。 参考文献(略) PCR.DGGE技术研究荣昌猪、长白、杜洛克猪肠道微生物群落多 样性 曾志光王红宁’高荣唐俊妮管仲兵 (四川大学生命科学学院,四川大学“动物疫病与食品安全四川省重点实验室”,四川成都望江路29号610064) 摘要本文采用PcR—DGGE指纹图谱技术研究荣昌猪、长白、杜洛克猪肠道微生物群落的多样性,进行了不同品 种间肠道微生物群落差异比较。 通过提取猪粪样总DNA,进行16SrDNA的V3区扩增及DoGE电泳分析。结果 表明,在DGGE图谱中,荣昌猪肠道微生物群落多样性最高,共34条较明显的种\属茵条带,长白、杜洛克猪分别 有31条、27条种惦,菌条带。其中有10个条带是三个品种猪共有的优势种嘱菌条带。荣昌猪与杜洛克猪的肠道微生 物群落差异为37.3%;荣昌猪与长白猪的肠道微生物群落差异为31.8%.研究初步表明,相同生长环境中,猪肠道微 生物群落差异可能与品种不同有关。 关冀词 变性梯度凝胶电泳(DGGE),荣昌猪,肠道微生物 近年来随着现代分子生物学技术的发展,尤其是基于16srDNA的指纹图谱技术及非损伤采样技 术的广泛应用,使人们能利用动物排泄物等,在不损伤研究对象尤其是珍稀动物的情况下,直接采 用核酸分子指纹技术)c寸动物胃肠道微生物群落结构及多样性等进行研究。由于16SrDNA的DGGE指 纹图谱技术简单快速、能直观有效地再现样品中复杂微生物群落及其多样性,无须菌群培养,已被 广泛应用于微生态系统研究中¨J。粪便样品因其能提供有效的动物肠道微生物群落信息越来越受到 人们的重视12J,已经成为研究动物肠道微生物群落的重要材料。目前已报道的对猪肠道微生物研究 主要集中在不同饲料、饲料添加剂和/或益生剂、及环境应激等对肠道菌群结构及功能等的影响方面 【3,4t 5·61。 本文采用PCR—DGGE指纹图谱技术分析研究了荣昌猪、长白、杜洛克猪粪样中肠道微生物群落 多样性,进行了不同品种间肠道微生物群落差异比较。研究相同生长环境中,不同品种猪肠道微生 物群落差异与品种的可能关系,未见报道。 1材料与方法 1.1实验材料 在同一养殖场中,随机抽取年龄、体重相近,体质健强的荣昌猪、长白、杜洛克三个不同品种 的经产猪母。不同品种各作一组,每组取5头。采集样品前一个月内,猪不能出现腹泻等疾病。每天 早晚各采集新鲜粪便样品一次,连续采集一周。所采样品放入.70℃保存,混合备用。 1.2粪样DNA提取 et DNA提取方法详见‰gal(2008)o¨。 1.3 16srDNA V3区PCR扩增 采用Touchdown GCC PCR对细菌16SrDNA的V3区进行扩增,扩增引物如下:341f二GC(5’一GCC CGCCGCGCGCGGCGGGCGGGGCGG GGGCACGGGGGGCCTACGGAGGCAGCAG一3’); 51 ACCGCGGCTGCT CCGGGGCGCGCCCCGGGC 8r(5’一ATT GG.3’)例,其中GC夹子为cGC GGGGCGGGGGCACGGGGG G一】。扩增体系为50¨l,阴性对照用ddH20作为模板。 猪的传染病一猪细西病 TbuchdownPcR扩增条件:95℃.5mln,94℃,

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