端粒酶活性测定方法.pdfVIP

2005 V01．23 No．16 端粒酶活性测定方法 江秀娟，，陕文生z，刘冬梅3，陈俊瑶1 (1．甘肃省肿瘤医院，甘肃兰州730050；2．甘肃省妇幼保健院，甘肃兰州730050； 3．兰州军区总院，甘肃兰州730050) 关键词：端粒酶；活性；检测； 中图分类号：G424．31 文献标识码：B 4．0岫ol／L。 文章编号：1671一1246(2005)16—0148一02 端粒酶是一种核糖核蛋白逆转录酶，合成端粒DNA顺序 中富含G的链。端粒酶复合物由6个亚单位组成：hTR(hu蚴联了PcR反应，所以4种脱氧核苷酸都必不可少。根据后期检 1)、hTERT测的方法我们还可以对dNTP进行标记。在舢中脱氧核苷 telomem∞RNA)、TEPl(telomera∞一∞sociatedpmtein 8hock (h岫锄telomera8ereversetIan$cIiptajse)、hSP90(heat90)、 酸使用浓度一般为50一80啪ol／L。 P23和dyskerin。端粒酶活性的激活是阻止端粒重复序列缩短 并使细胞获得永生性的必要途径。目前研究表明，在人正常的 制。T4932蛋白有稳定转录酶与底物结合作用，亚精胺有稳定 组织细胞中，端粒酶只存在于生殖细胞、造血干细胞和一些淋 巴细胞中…。由于端粒缩短与细胞老化有关，端粒酶在人类生 殖中发挥着重要作用。这对于进一步了解衰老机制，预防及治 疗某些病理状态下所致的生殖能力低下极其有利。因此，了解 些条件如：50—70衄ol／L 2．O啪01／L 和掌握端粒酶活性的测定方法对生殖系统疾病的研究具有重 EGTA；O．1ug／m1 要意义，本文就此做一综述。 醇等。 目前端粒酶活性检测方法大致归结为2类：一类是1989 使用不同检测方法，Tm垤法又会不同，这些方法主要包 年最早由Morin…建立的端粒重复序列延伸法，即利用端粒酶 括： 由卫立辛等D’建立，其原理是利用 自身逆转录合成端粒末端片断的特性，进行端粒的合成。然后 (1)Tf认P—ELIsA法。 通过加入Rna∞破坏端粒模板，再利用12％的聚丙烯酰胺电泳 生物标记Ts引物。然后通过链霉亲和素包被酶标板，利用链霉 分离，放射显影可见阳性条带。此方法优点在于其稳定性比较 亲和素与生物素结合能力使舢产物固定在酶标板。再与地 好，但是所需标本量大，敏感性差，实验复杂，所需时间长。另一 m心标记的抗地高辛抗体，最后加入显色液四甲基联苯胺 类是端粒重复序列扩增法，即-IR良P(telomeric聆peal锄p硒ca_ tion pmtoc01)法，是1994年l渤1等…利用PCR技术放大端粒延(TMB)显色，通过酶标仪测量结果。此方法灵敏、特异、快速，属 伸产物的量而建立的方法，是目前应用最广的端粒酶活性检测 于半定量测量。 技术。此方法优点在于所需标本量少，灵敏度高，但由于PCR扩 增过程中Tog酶容易受到各种因素影响，容易出现一些假阴性 采用硝酸银对聚丙烯酰胺凝胶电泳结果进行显色，成功地检测 结果，所以舢法稳定性比较差。 肿瘤组织中的端粒酶活性，从而建立了较为安全和简便的 TRAP法根据不同的检测方法又可以分为舢一EUSA、黜一银染色法。 Ⅱ认P一银染法等，但其都是以’Ⅱ认P为基础