DBS13 003-2015 食品安全地方标准 阪崎肠杆菌和沙门氏菌检测.pdfVIP

DBS13 河 北 省 地 方 标 准 DBS13/003—2015 食品安全地方标准 阪崎肠杆菌和沙门氏菌检测 2015-04-23发布 2015-05-01实施 河北省卫生和计划生育委员会 发布 DBS13/003—2015 前   言 本标准按GB/T 1.1-2009规定的格式编写。 本标准由河北省卫生和计划生育委员会归口。 本标准于2015年4月23日首次发布。 I DBS13/003—2015 食品安全地方标准 阪崎肠杆菌和沙门氏菌检测 1 范围 本标准适用于应用实时荧光定量PCR法定性检测阪崎肠杆菌和沙门氏菌。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本 文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB 4789.4 食品安全国家标准 食品微生物学检验 沙门氏菌检验。 GB 4789.40 食品安全国家标准 食品微生物学检验 阪崎肠杆菌检验。 3 方法提要 阪崎肠杆菌和沙门氏菌均属于肠杆菌科，本检测方法首先对肠杆菌科和阪崎肠杆菌进行同步检测。 当肠杆菌科为阴性时可直接报告沙门氏菌阴性；当肠杆菌科为阳性时再进行沙门氏菌的检测；当阪崎 肠杆菌为阳性时需按照GB 4789.40进行确证；当沙门氏菌为阳性时需按照GB 4789.4进行确证。 4 设备和材料 除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下： 4.1 二级生物安全柜 4.2 磁力搅拌器：0-2400 r/min。 4.3 卤素灯：500 W。 4.4 低温离心管架：1.5 mL，0 ℃。 4.5 水浴锅或金属恒温加热器：5 ℃-100 ℃。 4.6 漩涡振荡器。 4.7 离心机：12000 r/min。 4.8 移液器及对应吸头：10 μL、100 μL、200 μL、1000 μL。 4.9 超净工作台。 4.10 实时荧光定量PCR仪（含有FAM-, HEX- 和ROX-检测通道）。 4.11 冰箱：2 ℃—8 ℃和-20 ℃两种。 1 DBS13/003—2015 4.12 天平：感量0.1 g。 4.13 0.2 mL 8 联排管以及8联排帽（与PCR 仪配套使用）。 4.14 1.5 mL无菌透明离心管。 4.15 恒温培养箱：25 ℃±1 ℃，36 ℃±1 ℃，44 ℃±0.5 ℃。 4.16 无菌锥形瓶：容量100 mL、200 mL、2000 mL。 5 培养基和试剂 除有特殊说明外，所有实验用试剂均为分析纯。 5.1 缓冲蛋白胨水 （BPW）：见附录A.1。 5.2 营养肉汤培养基（NB）：见附录A.2。 5.3 125 µg/mL溴化乙锭单叠氮溴溶液（EMA）：见附录A.3。 5.4 DNA提取缓冲液: 0.1% Chelex100 （螯合树脂）水溶液。 5.5 吐温80。 5.6 按照表1和表4 的序列合成的引物和标记的探针。 5.7 Taq DNA聚合酶：5 U/µL。 5.8 Taq PCR缓冲液。 5.9