现代分子生物学研究领域的新标记物.pdfVIP

维普资讯 7 l生物工程进晨1997．Vo1．17，No．4 绿色荧光蛋白——现代细胞生物学与分子 生物学研究领域的新标记物 430 ， ， ． (武援病=；ii靳而丽忑o72) f f 单 ．胁，．i{I 八 摘要 从多管水母属Aequorenvicturia分离出的晕色荧光蛋白(GFP)，因其特有的生轴 1 化学性质及谖基因在异源知胞内的表达产轴亦能产生强烈的撵色荧光，使其在现代细胞 直一盼迭艇馁L序智 常需要用荧光物质作为标记。这种标记也是免 粗提液中一定还有 ·种蛋白即绿色荧光蛋白 疫荧光和免疫组化的基础。传统的荧光标记是 (greenfluorescentprotein，GFP)[’”。Morise 通过纯化蛋白质再共价结合到荧光染料上，但 荨[对GFP进行了分离和纯化，他们的实验结 是化学计量和染料附着的部位难于控制，因此 果表明，GFP的荧光发射峰在5O9nm，最大激 尚需再次纯化。若该蛋白需用于活细胞内检测， 发波长为395nm，并在475rim处有一肩蜂。当 最关键的问题是如何使其通过细胞膜。现在可 将ca”加入到含低浓度GFP的aequorin溶液 用分子生物学的方法产生荧光蛋白，以取代传 中时，光谱接近于aequorin发射的蓝光Ounax 一一一 统的标记方法 常甩的有荧火虫和细菌的荧光 472nm){而将aequoriu和 GFP按大 自然 比例 素酶基因，但由于它们都需要底物和辅助因子， 混合时，加入ca“，则光谱接近于活体的发射 因而在活体组织中的应用受蓟限制。由于绿色 光(~aax50~rn)。推测在活体 内，GFP通过荧 荧光蛋白所特有的生物化学性质 ，且该基因在 光素酶或钙活化光蛋白的能量转换过程，吸收 异源细胞内的表达产物亦能产生强烈的绿色荧 蓝光而后发出强烈的绿色荧光 Aequorea发光 光，使其在生命科学中的应用具有美好的前景 系统分子闻的能量转换过程如下： 本文就其研究进展进行简要综述。 、 Aequorin．= BFP ‘+blueLight l 一 、 绿色荧光蛋白的生物发光现象 GFP 即 _+ 早在六十年代初期，Shimomura等0首先 greenlight 从多管水母属 (Aequor／av／cto~a)中分离出一 (BFP为蓝色荧光蛋 白) 种称为aequoria的蛋白，该蛋白在结合钙离子 =、GFP的生色基团 后 可 发 射 蓝 光，当 时 称 为 光 蛋 白 (photoprotein)。它是分子量为20kD的单一多 从 jdlyfishAequoreaviciorm 分离 出的 肽链；在其