深黄被孢霉染色体数目及基因组大小的研究.pdfVIP

维普资讯 第 34卷 第 1期 南 开 大 学 学 报(自然科学) Vo1．34 № 1 2001年 3月 ActaSciemiarum 2~raturaliumUniversitatisNankaiens~ M ar．2001 文章编号 ：0465—7942(2001)01—0017—04 深黄被孢霉染色体数 目及基因组大小的研究 李明春 岳慧琴 邢来君 (南开大学微生物学系，天津 ，300071) 摘 要 利用钳位均匀电场凝胶电泳(contour—clampedhomogeneouselectricfield，CHEF)技术分离了 亚麻酸 (— linolenicacid，GLA)生产苗深黄被孢霉AS3．3410(MortierellaisabellinaAS3．3410)的染色体DNA，电泳接型 显示出其具有 l5条明显的带型，分离的染色体DNA带范围大约为 390～2660kb，基因组大小约为21640kb． 美键词：深黄被孢霉 (AS3．3410){钳位均匀电场凝胶电泳 (CHEF)}染色体DNAj电泳核型 中圈分类号：Q932 文献标识码 ： A 0 引 言 深黄被孢霉 (Mortierellaisabellina)可以产生多种人体必需的多烯不饱和脂肪酸 ，特别是对人体有 重要生理功能的 亚麻酸 (7-1inolenieacid，GLA)，它已作为利用微生物发酵法生产 7·亚麻酸最为普遍 应用的生产菌株 ．但 目前对深黄被孢霉的研究只局限于其生产应用，而对其遗传背景知识知之甚少，主 要是由于丝状真菌染色体 DNA分子量较小 ，很难在光学显微镜下观察到，所以至今 国内外未见深黄被孢 霉染色体的细胞学观察和染色体数 目的报道．为了更好地了解该菌株产生GLA 的机理及调控机制，首先 应摘清楚其基因组的基本结构，因此，我们利用脉冲电泳的方法首次确定了深黄被孢霉As3．341o染色体 的数 目和大小以及该菌株基因组 的大小． 自从 1984年 Schwartz等人口利用脉冲电场凝胶电泳 (pulsed—fieldgelelectrophoresis，PFGE)技术 成功地分离了啤酒酵母 (Saccharomycescerevisiae)染色体DNA 以后的十几年间，该技术不断改进 ，相继 建立了垂直交变场凝胶电泳(orthogonal—field—alternationgelelectrophoresis，OFAGE)，电场旋转凝胶 电 泳 (fieldinversiongelelectr0phoresis，FIGE)，横变场电泳 (transversealternatingfieldelectmphoresis， TAFE)，及CHEF系统0]．CHEFn是 目前广泛应用的系统，它克服 了其它 电泳系统使 DNA泳道发生弯 曲的缺陷，可分离高达 10Mb的DNA片段，应用该技术 已测定了一些丝状真菌如构巢曲霉 (Aspergillus nidulans)n]，黑曲霉 (A．niger)。．粗糙脉孢菌(Neurosporacrassa)-力及某些属 的酵母菌0 的染色体的 数 目和基因组的大小．本文介绍了建立深黄被孢霉AS3．3410电泳核型的方法 ，包括大量形成深黄被孢霉 原生质体及制备高度完整的染色体DNA的方法，并进行了脉冲电泳最佳条件的摸索，分离出了深黄被孢 霉完整的染色体DNA 带型 ，同时通过电泳核型确定 了深黄被孢霉 的基 因组结构． 1 材料与方法 1．1 菌种及培养基 菌种为深黄被孢霉 AS3．3410(MortierellaisabellinaAS3．341o)，由中国科学院微生物研究所菌种 收稿 日期 ：1999—1108 基金项 目：国家 自然科学基金及天津市 自然科学基金 (973607611) 作者简介 ：李明春(1968一)女，天津人 ，博士，剐教授 ，主要从事微生物学与真菌学的研究