水稻簇矮病毒的提纯及其性质半.pdfVIP

中国农业科学 1991，24 (4)：52-57 ScientiaAgrieultura Sinica 水稻簇矮病毒的提纯及其性质半 林奇英 谢联辉 谢莉妍” (福建农学院植物病毒研究室，福州 350002) 提要 采用差速离心和蔗糖密度梯度离心，可获得水稻蘸矮捕毒 (RBSV)提纯制剂。 提纯制剂经紫外扫描，呈典型的枝蛋 白吸牧 曲线，A260／240=1．18，A260／280：1．61 在 电键下观察提纯病毒，可见太量比较均一的球扶杠体，直径为60．0rim。捕 毒粒体有厦 层哀壳，蛋 白亚基清晰可辨。通过免疫扩散和免疫电镜试验，病毒粒体与 自制的RBSV抗 血清有明显的血清学反应，而这年士抗血清与水稻矮缩病毒 (RDV)、水稻瘤矮捕毒(RGDV】 不起反应。提纯病毒制剂 苯酚 甲基苯酚 SDS方法提取植酸。将其注射到介体 昆虫内． 具有侵染性。核酸制品有典型的核酸紫外吸收 曲线，A260／228：2．27，A260／280：2．O2 根据核酸在不同离子强度下对RNaseYJ稳定性荨的测定，表明其植酸属双链RNA。根据紫 外吸收测定，RNA在RBSV粒体中的含量为 17．5％一20．1％。用聚丙烯酰胺凝胶 电泳， 其RNA的总分子量为l666×10d 含组j}分子量为 2．70 2．30、190、1．70、1．68、 1．50、138、1．20、1．10、0．60、0．35和0．25 (×10)。这 些结果表 明，RBSV是植物呼肠 弧病 毒亚组 I的一个新成员。 关麓词 水稻蕉矮病毒；提纯； 性质；植物呼肠弧病毒亚组 1 水稻簇矮病(RiceBunchySttmt)~ 普矮病 …，是我国70年代发现的一种新的 水稻病毒病 s9。有关此病的地理分布、产量损失、寄主范围、发病因素和防治试验 以及病毒的某些特性和血清学性质，前已作过报道 一‘、lfJ]v本文着重报道水稻簇矮病 毒 (RBSV)提纯及其性质的研究结果。 材 料 与 方 法 一 、 供试毒源 为本室保存的RBSV沙县毒源，以带毒黑尾叶蝉 (Ne otetti~cinc船g直 人工接种 繁殖在窄叶青8号品种上的水稻病株。 二、病毒提纯 采用氯仿澄清、聚乙二醇 (PEG)沉淀、差速离心和蔗糖密度梯度离心的方法。剪 取接种发病的新鲜稻叶250g，冰冻过夜，加入1O00ml的0．1mol／LpH7．啪 磷酸盐缓冲 液，用石制研钵磨碎，纱布过滤，滤汁以3000r／rain离心20分钟，取上清液，加入 本文=flg~1年 1月10日收到。 叫t生辞和国家 自拣科学基金资助项 目。车院测试中心、省衷科院中心实验室．幅建医学院电镜室和省医学科学 研究所培干大力协助，特此致谢 。 ¨ 谢藕妍现在车院测试 中心工作。 4期 林奇英等：水稻簇矮病毒的提纯及其性质 2O％ (V／V)氯仿，摇动lO分钟，弃残渣，上层液以8000r／rain 离心 20分钟，弃 沉淀，上清液加入10％PEG (分子量6000d)、 3％NaCl， 4℃下过夜，1500or／min 离b20分钟，取沉淀，用0．01mol／L、pH7．O的磷酸盐缓冲液50ml悬浮，4000r／min 离 t~,20分钟，重复2次。均取上清液合并，经2O％-50％蔗糖密度梯度离心，RPS65T转 头25000r／min离 t~,150分钟，取管内乳白色的沉淀带液，用少量上述磷酸盐缓冲液悬浮， 8000r／rain离 020分钟，所得上清液 (1．5m1)即为提纯病毒制剂。 三、紫外扫描 取上述提纯病毒制剂，经中性磷酸盐缓冲液稀释后，用 日立557型双光束双波长分光光 度计进行紫外扫描，计测病毒的紫外全波吸收值 四、电镜检查 将上述病毒提纯制剂点于有Formvor膜覆盖的铜网，以2％磷钨酸负染，在Hul2A 型电镜下观察。 五、抗血清的制备 以提纯病毒作抗原，加福氏佐剂，肌肉注射家兔，每周 1次，共 4次，最后一次注 射后 2周从颈动脉取全血，制备抗血清。采用小试管环状沉淀法测定效价。所得抗血清 通过琼脂双扩散和免