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±&女&矗生取k趔i生监且丑且壹塑生』盐正&±吐L堡l虹超J蛆LX4世 ·地方性砷中毒·基础医学 三氧化二砷对Hela细胞ER0【及PRmRNA 表达的影响 夏雅娟’2孟萌3张峰3牵建云。刘东军 【I自鼙古*^#日精*£十o.自2^日自☆特0 3003112自t^^{女*自自*≈十o.q乳自翱±目t 罐澈察受体是一种配体依鞍性基因转录因子. 提取细胞总RNA.紫外分光光度计涮定RNA浓度。 在生物体内具有广泛的生物学艘麻.其基因表达水 ljcDNA的合成:按照反转最试捌盒操作说明进 平的改变与许多健康效应包括心血管病、肿蛔、生 s. 行,反应条件为37℃15mln.85℃5 殖发育等密啊棚兰。许多环境雌激素物质可通过 ER侑弓传递系统介导一系列生物学效血.西此ER 的理选量:按照实时荧光定吐FCR试剂盘撮作说明 技认为是环境雌激翥的效应标志物.PR是ER的下 进行,采用2“田法计箅比值。ER、PR的PCR上下 游转录园子.■青联台发挥雌澈索作用。本研究通 游引物Pl、P2由大莲宝生物f.程有限公司合成。 过三氧化二砷作用于Hela细胞.观察缅胞ERa匣 B—actln基因引物由大连蛊生物T程有限公司提供。 PRmRNA表达的变化.旨在进一步证实碎的雌激素1.7受体竞争结合试验:各组处理测得的cDm为 样活性。 全部结合.“200 nmot/LB处理测得的cpm为非特 l材料与方法 异性结台进行校正。以,H—E:与01%DMSO处理组 1.1主要材料与试剂:HeL丑细胞由中国科学豌上为对照组,苴cpm值为I.借计数仪测得的由细胞 海生命科学院细胞资源中心提供。^蛐,(分析纯.北 京化I厂),RPMI一1640培养基耪(茭周GIBCO公 1.8统计学分析:粟刖统计学软件SPS$130进行 司).E2拈抗刺(『cI)、E2《美国Sigma公司)。胎牛血方差分析.进一步多重比较采H{KSD,f检验。 清(杭州四譬青生物1+程材料有限公可)无激索血 2坫累 清(葡聚糖活性炭处理血清,上海基迈生物科技有 2.I TiⅢe SYBR 限公司)。TRlznl试剂盘,TAKABA PCR扩增后,经电濂可见片段大小与预期相符.见 RT—PCRKit(由大连宝生物工程有 固I。 PrlmerScriptTM 限公司提供) 1.2主耍仪器设备CO.-恒温培养箱(美国);倒置 显傲镜(日本);台式抵温离心机(德国):荧光定量 PCR扩增仪(美国);电赦仪(北京);紫外撮胶成像 分析系统(Eu);液体闪烁计散仪(美国)。 1.3细胞分组、培养与传代:实验按处理田索分为 8组.无激素血清配澍的RPMI一1640培养液分别古 5、1 B(I…I/I.),As妒】(O0、5由岬VL)、ICI(500 nmol/L)E:(1nmol/L)+IC[1500 nmoI/L)、As如3 (1.0“啪M.)+ICI(500n啪I/L)厦对照组。细胞于 目IRT-P(:R,#m女■ RPM[一1640培养基(舍5%胎牛血清,100kU/L青 托测序结果:RealTimePcR产物经宝生物工程 (大连)有限公司测褥的ERd,PR的基因序列与 霉素、100g/L链霉幕)、37℃、饱和湿度5%CO:的 恒温箱里培井.O25%胰酶消
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