马尔尼菲青霉生理学特性研析.pdfVIP

BulemerRichardCalderone 曹存巍李若瑜万拮刘伟王晓红王端礼Glenn 北京大学第一医院真菌与真菌病研究中心100034 【摘要】日的研究温度、pH值、盐浓度对马尔尼菲青霉(PM)生长及双相转换的影响。方法观察ll 制。菌丝相开始向酵母相转换的温度为32℃，但不同菌株向酵母相转换的能力有差异。所有PM菌株的菌 的研究，对今后寻找PM的环境来源，以及揭示其体内致病机制均具有重要意义。 【关键词】马尔尼菲青霉，生理学，温度，pH，盐浓度 马尔尼菲青霉(PM)感染所致的马尔尼菲青霉病(PSM)是一种凶险的、极易致死的系统性真菌病， 在东南亚、我国南方广西、广东等地有区域性流行，近年来它已成为东南亚AIDS患者最常合并的真菌感 在北京、四川、重庆、江西等省市都先后有病例报道m剐，应引起高度重视。PM为温度双相性真菌，在25 ℃培养时呈菌丝相；在37℃培养或在组织中生长时为酵母相，即人体中的致病状态为酵母相。竹鼠被认为 人可能从竹鼠传染上PM，或者二者从同一个环境来源感染上该菌。然而PM的环境来源目前仍不清楚，青 霉属中的大多数种都是泥土腐生性的，但PM在环境中却很难分离到，对28份竹鼠巢穴泥土的培养中只 有一份分离到该菌1710此外实验室模拟的PM与其它真菌共培养的实验中发现，在泥土中PM的竞争存活 能力较其它真菌弱t81．因此明确PM的环境来源对进一步研究它通过何种途径致病具有重要意义。对其它 的致病性双相真菌的研究发现，粗球孢子菌具有在高温及高盐浓度下生长的生理特性，该菌凭此特性得以 在北美洲沙漠环境中存活、流行致病‘91。同样的，研究温度、pH及盐浓度等因素对PM的影响，对查找 PM可能的环境来源以及该菌在体内致病的机制具有重要意义。 l材料和方法 1．1实验菌株及孢子悬液制备 株为野生竹鼠分离株(菌株来源及特性见表一)。所有菌株均经双相性及菌落形态鉴定后采用灭菌蒸馏水 灭菌水溶液冲洗收集孢子，‘调节孢子浓度至0．4麦氏单位，在每个培养皿中接种5×104个孢子进行实验。 1．2 PM的温度实验 所有实验菌株均接种于SDA平皿置湿盒中于不同温度培养箱中培养。 1．2．1 PM生长的温度范围及温度与生长速度的关系实验温度范围设置为4—45℃，当在最高温度不生 长时，以O．2℃为单位逐渐下调培养温度直至有可见菌落生长；而在最低温度不生长时则以1℃为单位逐渐 度点培养10天的菌落直径大小，取均数绘制生长陆线。 1．2．2 PM菌相转换与温度的关系从30℃至39℃培养观察PM从菌丝相转换至酵母相的确切温度，以 及不同温度下酵母相转换程度。挑菌落棉兰染色显微镜下计数菌丝及酵母细胞数，共观察lO个高倍镜视野。 1．3 pH和盐浓度对PM生长的影响 用磷酸盐缓冲液及1M ’ 2007年3月15．18_中■杭州 113 二，大会发言 周。以有无可见菌落为标准判断生长情况。 所有实验均重复三次以确保实验的可重复性。 2结果 1温度对PM生长及双相转换的影响所有PM菌株均能在8—39℃的温度范围内生长。从生长曲线看， 落表面变为黄绿色绒状，基底红色，培养基中有可溶性酒红色色素产生，两周后菌落直径约26ram。镜下 除见到典型帚状枝、长而散乱的孢子链外，其中三株竹鼠分离株还可见到呈部分螺旋状的菌丝(见表一， 及图2)。当温度降至lO℃以下时菌落生长变慢，8。C培养两周后菌落仅约7mm，并且红色色素产生减少。 在40℃所有菌株的生长均受到抑制，但将菌株从40℃重新置于28℃培养时，均生长良好。 菌丝相向酵母相的转换出现在32℃，菌落表面呈膜状，灰红色，培养基中见少许红色色素。镜下可见 到菌丝、关节孢子及数量不等的圆形或椭圆形酵母样细胞。不同菌株向酵母相转换的能力不同，临床分离 株BMU 见到散在数个关节孢子及酵母样细胞(图3)。随着培养温度升高菌落中酵母样细胞所占比率逐渐升高，37 ℃时菌落中酵母样细胞所占的比率最高，可达50一80％。当温度升高至39℃时，对于在37℃已发生明显 酵母相转换的菌株，酵母样细胞增加得很少；而37C酵母相转换少的菌株，在39。C时酵母相转换会明显 增加(见图4)。32℃难