人基因治疗的研究概况.pdfVIP

细胞后hFIX表达量的方法，并同时反映病毒载体的感染能力。 在制品的外源病毒检查中由于腺相关病毒为复制缺陷型单链DNA病毒，只有在辅助病毒的参与下才 能进行复制扩增，由于辅助病毒的致病性，因此其在终产品中的控制十分重要，首先通过PCR在核酸水平对 辅助病毒的残留片段进行了限量控制，其次以空斑法确定在终产品中没有完整、具备感染能力的辅助病毒， 人类疾病的病因，但由于其理化性质的特殊性，它对腺病毒、腺相关病毒载体的生产是一种重要的污染成分， 我们采用PCR方法，针对wtAAV的特殊序列进行扩增，对终产品中的wtAAV进行限量控制。 常毒性实验；同样从制品整体角度确保了安全性；而针对我国具有自主知识产权的腺相关病毒载体工艺，我 相应指标要求提高了lo倍。 国外对基因治疗产品的控制主要以病毒载体特有的理化性质为重点，本研究在与国外保持一致并有所 创新的同时，对制品的生物学活性和安全性评价又进行了强调。因病毒载体的共有特性，本研究不仅能够指 导以腺病毒、腺相关病毒为载体的基因治疗药物质量控制，而且对其他病毒载体的质控方法与质量标准的建 疗指导原则，并为我国“人基因治疗申报临床实验指导原则”及相关法规的编纂制订提供了实验依据， 本研究建立的我国病毒载体类基因治疗药物质量控制技术平台，可确保产品质量可控、安全有效，质量 可控，促进我国创新药物产业化的进程，发挥特有的社会、经济效益。(参考文献略) 人基因治疗研究概况 莫泽乾(广西壮族自治区药品检验所) 摘要 目的：将人类基因治疗的简况介绍予药检同行。资料来源：阅读有关科学论文、综述文章和专著。 结论：此综述介绍了人类基因治疗方法、最常用的基因转移技术、基因治疗制品的生产和质量控制，人类基因 治疗的临床试验取得了极大进展。 关键词人类基因治疗基因转移基因治疗制品临床试验 基因治疗是指改变细胞遗传物质为基础的医学治疗。早在二十世纪六十年代末，人们就开始将含精氨 9月14日在美国国立卫生研究院(NIH)II缶床中心进行，即W．French 委员会的许可后，通过基因治疗技术将正常的腺苷脱氨酶(ADA)基因导入因先天性腺苷脱氨酶缺陷而患重 度联合免疫缺陷综合症(SCID)的、年仅4岁的AshantiDeSilva女孩体内，结果证明了由病毒介导的外源正 常基因确实可以能够在患者体内表达正常的、具有生物活性的蛋白，这一开创性试验虽然未能在临床意义上 取得成功，但它却受到了众多的关注，在医学史上的意义也将是重大的。人基因治疗研究也从此得到了迅速 的发展，已成为当前各种癌症、心血管病、遗传病、艾滋病等几大顽疾治疗研究的热点。现就人基因治疗的方 法、载体系统、制品的生产与质量控制、临床试验和存在的问题等简述如下。 1基因治疗的方法 基因治疗的技术和方式日趋多样化，但按基因导人的形式，可归纳为以下两种方法： 1．1体外基因导人法(exvivo) 该法是在体外细胞培养时，用适当的方法将基因导人人体自身或异体细胞，该细胞经培养扩增后再注入 人体。其制品形式是外源基因转化的细胞。此法易于操纵且较为有效。但是由于受到细胞培养、生长和注 入等条件的限制，目前仅应用于血液、皮肤、肝脏、免疫系统和肿瘤细胞等，其制品不利于大规模生产。 1．2体内基因导入法(invivo) 该法是将外源基因装配于能在人体细胞表达的载体，直接导人人体。其制品形式是基因工程技术改造 801 的病毒、重组DNA或DNA复(混)合物。其制品可进行大规模生产。但此法的效果相对较差，不易于将治 疗基因准确导人体内靶细胞，目前应用于肝脏、脑和呼吸道等少数部位的基因治疗。 2基因治疗的基因载体系统 基因治疗都必须通过适当的载体将外源基因转移至特定的细胞内。在目前统计到的636个基因治疗临 以上数据表明，以病毒为载体的基因治疗方案居多。这主要是因为非病毒转移效率较低，特别是在体内 表达的时间不长，尽管某些采用物理方法转移基因的治疗方案有一定前景，但转染效率也很低。而以病毒为 载体的基因转移，可利用病毒对细胞的天然感染能力将外源基因导人细胞中，效率明显高于非病毒载体系 统，在基因转移系统和基因治疗中一直占据主导地位，因此目前仍以病毒载体最为理想口。 反转录病毒是使用最多最广泛的一种基因转移载体，在目前统计到的3496例基因治疗临床试验中， 达时间较长，基因转移效率较高，