柔嫩艾美耳球虫EtMIC2酵母表面展示.pdfVIP

论文集 家畜寄．生虫学分会第十二次学术研讨会 柔嫩艾美耳球虫EtMIC2的酵母表面展示 孙慧。2”，王龙江1‘2”，王甜甜。2…，陈佩佩。2”，史文艳。2”，刘卿1’2一，张杰。23，陈正涛。2一， 李宏梅。2一，肖一红1’2…，y_2r昆“2…，赵孝民1。21” (1．山东农业大学动物医学学院；2．山东省动物生物工程与疾病防治重点实验室；3．山东省畜禽疫病防制 工程技术研究中心山东泰安，271018) 摘要：本研究利用酿酒酵母表面展示系统展示柔嫩艾美耳球虫微线蛋白基因EtMIC2，为下一步研制活载 佳诱导时间为48h。 关键词：柔嫩艾美耳球虫；酵母表面展示；微线蛋白．， 鸡球虫病是由一种或多种艾美耳球虫寄生于肠上皮细胞内所引起的原虫病。10～45日龄的鸡最易感 染，发病率和死亡率可高达80％。所造成的直接和间接经济损失，全世界每年约有10—30多亿美元[1．5】， 我国每年约有30多亿人民币。鸡球虫病的防治一直主要依赖药物。然而，长期大量用药导致了抗药虫株 的出现，要求药物的剂量和种类不断增加，不仅造成生产成本的提高，还造成产品中的药物残留问题。 长期以来，科学工作者一直寻求替代药物的方法来防治鸡球虫病，而从免疫的角度预防鸡球虫病无疑是 最好的选择。 目前经注册的商业化鸡球虫疫苗已有十几种，全部为活苗。现用于养鸡业注册的商业鸡球虫减毒活 苗多是经鸡或鸡胚连续传代后选育出的早熟弱毒虫株。此类减毒活苗保持了与野株活苗相当的免疫原性， 而在安全性上大大优于野株活苗。但仍有很多局限性，其最大的缺点为生产成本太高，因为此类减毒活 苗必需用鸡来生产，造成了其昂贵的生产成本。此外，此类减毒活苗对接种鸡的生产力仍有一定影响。 因此，科学工作者一直寻求效果更好，制备更简单，成本更低廉，应用更安全的鸡球虫疫苗。 活载体疫苗是目前疫苗研制的重要方向，活载体疫苗向机体递送疫苗抗原，使抗原物质对黏膜的免 疫刺激作用更接近于病原体的自然感染途径。细菌、真菌和病毒均可作为重组活疫苗载体。常用的细菌 载体系统主要由减毒沙门氏菌、乳酸杆菌、单核细胞增多性李斯特菌和小肠结肠耶尔森氏菌等。表面展 示是近年来发展的蛋白表面展示技术，是构建活载体疫苗的关键和基础。酵母表面展示系统展示的蛋白 更接近于天然蛋白，以酿酒酵母菌作为抗原表达载体构建的重组全酵母疫苗，已在抗肿瘤及抗病毒感染 的防治研究中，显示出了很好的研究价值和应用前景。 选择适当的抗原蛋白质是构建活载体疫苗的另一关键。鸡球虫微线是项器的细胞器之一，位于子孢 子和裂殖子前端，它所分泌的多种微线蛋白参与虫体识别和粘附宿主细胞的过程。其中EtMIC2是一种重 要的微线蛋白，很多研究表明，其能诱导鸡体对柔嫩艾美耳球虫产生一定的免疫保护作用。 国内外对酿酒酵母载体疫苗在柔嫩艾美耳球虫疫苗的研究应用上尚未见报道。本研究基于酵母表面 测表明EtMIC2蛋白成功展示于酵母细胞表面，为下一阶段鸡球虫活载体疫苗的研制及免疫效果的评价 奠定基础。 1材料与方法 1．1虫株、菌株与载体 壮；大肠杆菌(E．coli)感受态细胞TOPIO recAlara A139 A(ara一1eu)76979alUgalKrpsL(Strr)endAl A GALl—AGAl：：URA3ura3-52leu2△1his3200 canI 酵母EBYl00【MATa trpl pep4：：HIS2prbl△1．6RGAL]和 酵母表达载体pCTCON2均由美国麻省理工学院Wittrup教授馈赠。 1．2主要试剂 一040— 家畜寄生虫学分会第十二次学术研讨会 论文集 1ststrandcDNA 剂购I刍Invitrogen公司；The 康为世纪生物科技有限公司；鼠源EtMIC2多抗由本实验室制各。 1．3引