肉品中肠毒素性大肠杆菌和肠沙门菌多重PCR检测方法建立.pdfVIP

肉品中肠毒素性大肠杆菌和肠沙门菌多重PCR检测方法的建立 王海花35，张晓峰1孙红丽2 (1．河南牧业经济学院，河南郑少H450011；2．长治市畜牧局，山西长治046000) 摘要：食源性致病菌是造成我国食品安全的重要原因之一，其中大肠杆菌和沙门菌是常见的食源性致病菌，这两种病 原菌常常同时出现在肉制品中，因此快速检测它们对有效控制其传播和预防食物中毒非常重要。本研究利用肠毒素性大 PCR方法，用建立的多重PCR方法对30份临床可疑腹泻样品进行检测并与生化试验比较。结果表明：多重PCR扩增出 了预计的PCR产物，两种方法检出大肠杆菌和沙门菌的阳性符合率达100％，并且所建立的三重PCR日。‘r．够特异性的同时 因此，实验所建立的三重PCR方法在肉品ETEC和肠沙门菌的检测中有一定的应用价值。 关键词：肠毒素性大肠杆菌：肠沙门氏菌； 多重PCR； 食源性致病菌是造成我国食品安全的重要原因之一，其中大肠杆菌和沙门菌是常见的食源性致病 菌。大肠杆菌是自然界广泛存在的一种条件性致病菌，在卫生学上常被作为卫生监督的指示菌[I】。沙 门菌能引起人的胃肠炎、伤寒、败血症等症状[2]。这两种病原菌常常同时出现在肉制品中，因此快速 检测它们对有效控制其传播和预防食物中毒非常重要。多重PCR是在常规PCR基础上发展起来的扩 增技术，采用该技术可实现对多个或单个致病菌多个毒力基因的同步检测【3，4，5]，本研究的主要目的 就是利用肠毒素性大肠杆菌ETEC 特异性引物从而建立一个多重PCR反应，旨在为肉品行业提供一个简便、快速、准确、灵敏的能同 步检测肠毒素性大肠杆菌和肠沙门菌的方法。 1材料 1．1菌株 沙门氏菌均由江苏省农业科学院兽医所提供，猪霍乱沙门氏菌购于中国兽药监察所，金黄色葡萄球菌 购于江苏省疾病控制中心。 1．2引物设计 Primer Primer软件设计引物，如表1所示，各引物均由上海捷倍思公司合成。 表1多重PCR引物序列、产物长度以及开放阅读框中的位置 矗 产 始 细菌类型 引物序列 ，物 ：， 7L Lq 置 度bp 1 1 肠沙门氏菌 P1：5-TGCGTATTCTGTTTGTCGGTCC— 08 6 1roB 7 06 P2：5-TACGTTCCCACCArrCTl℃CC_3 】3 4 P1：5一GGCGACAGATTATACCGTGC一3 M。里警 r1 4 性大肠杆菌 T P2：5一cGGTcTC㈣cccTGTH 91