人胰岛素样生长因子-1融合表达及鉴定.pdfVIP

治疗性制剂 人胰岛素样生长因子 的融合表达及鉴定 曹玉锋李霄培陈子杨常东英贾 媛张健锋吴 菲王伟善时成波 长春生物制品研究所有限责任公司生物技术室长春 摘要 目的利用原核表达系统融合表达人胰岛素样生长因子 并进行纯化及鉴定 方法根据大肠杆菌密码子偏好性设计并合成 基因克隆至 载 体构建重组原核表达质粒经及测序鉴定正确后转化大肠杆菌 挑取阳性菌落进行 诱导经分析表达量及表达形式表达产物经 亲和层析进行纯化法检测纯度 非干扰型蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度纯化产物经肠激酶酶切并经 鉴定 结果重组表 达质粒 构建正确融合蛋白主要以可溶形式表达相对分子质量约为 相对表达 量约为 经亲和层析纯度不低于 浓度为 经肠激酶切割可见相对分子质量约为 的 目的条带 分析可见预期的特异性免疫印迹条带 结论 已成功构建并表达了 融 合蛋白为其生物学活性研究及规模化生产奠定基础 关键词 胰岛素样生长因子 原核表达融合蛋白硫氧还蛋白 人胰岛素样生长因子 由 多个氨基酸残基组成的含 个二硫键的单链 是一类具有胰岛素样作用的 蛋白相对分子质量为 等电点为 多肽 在结构上与胰岛素原具有高度的同源性是 因其具有调节糖脂代谢促进上皮神经 肌肉骨骼等多种细胞生长分化及创伤修复作用 割位点 下游引物 而被广泛用于糖尿病胰岛素抵抗综合征侏儒症 下划线部分为 酶切位点 肝炎及神经系统疾病等多种疾病的治疗并取得了 全基因序列及引物均由北京三博远志生物 良好的效果 年美国 批准重组人 技术有限责任公司合成 商品名 上市用于 水平低 重组表达质粒的构建 下及生长激素基因缺失而引发的成长性疾病 以 质粒为模板 目前原核表达的 多以包涵体的形式存 扩增 基因 反应条件为 预变性 在复性困难且重复性差因此人们期望通过原核 变性 退火 延伸 可溶性表达获得高活性的 基因工程产品 共 个循环最后 再延伸 产物经 本研究将 基因克隆至 原核表达载 琼脂糖凝胶 电泳