高温、噪声、振动对热应激蛋白70mRNA（HSP70mRNA）基因表达影响分子生学研究.pdfVIP

高温、噪声、振动对热应激蛋白’70nRNA(HSP70mRNA)基因 襄达影响的分子生物学研究 徐建华1邱仞之2柳川?柯文棋1 (1海军医学删岁：所目址艇卫生研究室) (2 第一军医大昔热带医学研究所) (3 军事医学科学雕丛础医学研究伊) 住不利的环境中．各种有机体都有共同的分f：反应，即正常基冈的表达抑制而一绸 特殊基囡——庶激蛋Fj基司被激活利表达，这一臂遍的生物学现象被称为“应微反应” (stress StressProtejns，HSPs)』E廊激蛋向(Stress HSPs作为一种廊激蛋F{，而且在进化上高度保守，随明它对生物体的生存及住f≯激反应 HSPs。 中有重要的生理、病理意玉、。其中HSP70被认山是最保守，含量蛀多t4最重要『FJ J’n 目前尚无在军事卫生领域p用分予杂交Noytbe1)jot方法检测哺乳类动物肝圳织巾诱 导的ttSP70 mRNA表达最，以及研究振动噪声一者与高温复合闳素诱导HSP70基闪表达及 其相荚关系的报道。本研贫为探索高瀛、噪，，、振动与[{SP70合成的荚系及意义{垃供实验 依据。 材料与疗法 1动物模型 清洁级雄性wist3r人24只，2、)o～250H，随机分成4纽。 (1)对照组。术加受试1q素，宣温22--+i。C， 5×lo m／s?1000({z． (2)躁声振动组。全身挤动，角振频率60Hz，振十i Ill，加速度4 dB。 稳态噪声95 (4)复台组。(2)组与(3)纲实验条什相加。 清酮动物，特殊术笼夤自：头吲定．川RM一6000八!}屯理记录仪记录再种生理指怀。受 h，断头处死，取l 试动物置多功能人{’气候室p受试1}，，室温22‘℃：恢复2 g肝|_{i：如『ll 前缃组织，制备匀浆。 2组织总RNA的提取 mI。 采削异硫酸氰胍非超声离心一步法提取纽彭{总RNA。ig火鼠叶l【叶前角组纠加i．5 m01／L 1110b／L异硫酸氰呱，iX05％一N一川桂肌氧酸(SaFCOSyl)、0．1 裂解液：4 p-巯基乙 moL／h m1．平衡酚、氯仿： 醇]中匀浆，于冰浴中加2 pJJ4．0醋酸钠150川摇匀。加入1，5 n，l 异戊醇(49：1)300mL，摇匀]0min，冰浴】勘j3，000r／min离心20min。取上清，加等体 积异丙醇离心。氯仿：异戊醇复抽提一次。RNA沉淀物j{{70％冰乙醇洗涤．真空抽干，50札 无RNase水溶解，Hj紫外分光光度计测其纯度及浓度。取lpgRNA溶液于l，5％琼脂糖 rs 28rS 凝胶中f也泳，检测18RNA秆I RNA完整陡。提取的绸织总RNA经甲醛变性琼脂糖凝 胶电泳，任20×5SC济液lp利jH虹吸原理将甲薛变性琼脂糖凝胶中的RNA转移到尼龙膜1．。 转穆有RNA的尼龙膜在80℃烤箱中烤于。 3，Northern杂交分析