基于磁珠的可见光检测微阵列信号的新方法.pdfVIP

第23卷第1期 分析科学学报 2007年2月 OFANALYTICALSCIENCE Feb． 2007 V01．23No．1 JOURNAL 6144(2007)01—0001—04 文章编号：1006 基于磁珠的可见光检测微阵列信号的新方法 郭永刚h2～，张冠斌1’2…，熊强1’2…，郭 曼3，邢婉丽¨’2～，程 京1’2’3 3．生物芯片北京国家工程研究中心，北京102206) 摘 要：以磁珠作为标记物，提出了一种在微阵列上检测核酸的新方法。该法基于生物 素同链霉亲和素的亲和作用，利用磁珠的超顺磁性和宏观可见特性，使得杂交结果可在 普通的光学显微镜或放大镜下检测，甚至肉眼可见。以合成探针为对照，用参比荧光标 记染料Cy3标记方法，对这种新方法的检出限进行了研究，并在此基础上采用大肠杆 菌16SrDNA的PCR产物作为样品，进行了细菌检测的尝试，取得了较好的实验结果。 本法所得的实验结果易于观测，无需采用大型的荧光检测仪器，因而大大降低了检测成 本，与其它可见光检测方法(如金胶银染等)相比，具有方便、快捷的特点。这种新方法 在传染病检测和环境监测中将具有广阔的应用前景。 关键词：磁珠；微阵列；链霉亲和素；生物素 中图分类号：Q503；Q52文献标识码：A 自微阵列技术诞生以来，许多标记检测方法应运而生，如同位素、酶类、半抗原、荧光素、纳米金等。1。。 当前，荧光标记具有种类多、灵敏度高等优点，是最为常用的标记检测手段。但是，这种标记方法依赖于昂 贵的检测仪器，检测成本较高，且检测结果不能长期保存。除此之外，纳米颗粒，如金纳米颗粒作为非荧光 类的标记物，也已广泛应用于微阵列信号的检测口]。然而，基于金纳米颗粒的检测方法通常需要额外的银 J，多数具有超顺磁性，在磁力下易 染步骤，操作较为繁琐且时间冗长。磁珠在生物学领域又称生物磁粒L3 于操作，已在免疫分析H]、基因工程口]、导向药物邸1以及细胞分离口1等领域获得了广泛的应用。磁珠作为 核酸杂交检测的标记物也有报道[8’…，但它们多数依赖于微加工技术，加工成本较高。 作者在玻璃芯片上以链霉亲和素包被的磁珠作为标记物，采用生物素标记的核酸为样品，通过链霉亲 和素与生物素的亲和作用，进行核酸杂交检测，杂交结果肉眼可见，或可通过普通显微镜观测，所得结果可 长期保存，且定性检测成本低。实验所得结果经进一步的图像采集，可进行定量分析。同时，基于这种方 法进行了细菌检测的初步研究，并取得了较好的效果。 1 实验部分 1．1仪器与试剂 jing，China)完成或提供，荧光扫描仪为Scanarray一4000(Packard 学显微镜为Leica Research， 5500(Cartesian Waltham，MA，USA)。核酸点样仪由PixSys SMP3(TeleChem nL，点 样针为Model 直径150 btm，点间距350／am。 收稿日期：2005—12—25修回日期：2006—02—18 通讯联系人：邢婉丽，女，教授，博士生导师，研究方向：微流体生物芯片，药物筛选芯片等． 万方数据万方数据 第1期 郭永刚等：基于磁珠的可见光检测微阵列信号的新方法 第23卷 所选磁珠(DynabeadsMyOneTM Biotech，