三七中高产人参皂苷Rd真菌的鉴定.pdfVIP

三七 中高产人参皂苷 Rd真菌的鉴定 王艳 ，代永东 ，葛锋 ，虞泓 ，赵方允 1(昆明理工大学 生命科学与技术学院，云南 昆明，650500) 2(云南大学 中草药生物资源研究所云百草实验室，云南 昆明，650091) 3(昆明市延安医院，云南 昆明，650224) 摘 要 从云南文 山三七根茎上分离得到具有转化人参皂苷活性 的真菌。采用 的方法是：利用平板划线分离 法 ，从三七根茎中分离纯化得到2株真菌，用该菌株对三七进行液态发酵 。通过 HPLC检测 ，对发酵前后皂苷变 化进行分析 ，对两株真菌进行形态显微鉴定及 ITS序列分析。结果表 明，菌株形态及显微特征和产孢结构与木 霉属一致 ，利用 ITS序列与相关类群构建聚类树 ，确定实验 2菌株 ITS总长度为 550bp，与长枝木霉 Trichoderma longibrachiatumRf／ai株菌 (ATCC18648、ATCC208859、DAOM167674、DAOM231259)仅在全 ITS第 134位点上发 生间或缺失突变 ，鉴定 2株真菌均为长枝木霉 longibrachiatum。HPLC分析显示，菌株能够将三七 中量多的大 极性皂苷转化为小极性皂苷 ，并高产人参皂苷 Rd。结论 由此可以证 明长枝木霉具有转化三七 中皂苷的活性。 关键词 三七 ，生物转化，长枝木霉 ，鉴定 ，ITS，人参皂苷 Rd 三七 Panaxnotoginseng (Burk．)F．H．Chen为 菌株 WYA2012和 WYAC2012均从云南文山的 五加科人参属植物，主产于云南 ，主要活性成分为三 三七根茎分离纯化获得 ，保存于云南大学生命科学学 七总皂苷 (Panaxnotoginsengsaponins，PNS) 。 目 院云百草实验室。 前为止 ，已从三七中分离出70余种人参皂苷，均属达 1．1．2 试 剂 玛烷型四环三萜皂苷 。其 中人参皂苷 Rd的含量 三七皂苷 R1、人参皂苷 Re和人参皂苷 Rbl，购 较少 ，西洋 参含 0．1％ ～0．2％，人参含 0．2％ ～ 于中国药品生物制 品检定所 ；人参皂苷 Rgl、人参皂 0．3％，三七含 0．5％ ～0．7％ 。Rd对心脑血管、神 苷 Rg3、人参皂苷 Rhl、人参皂苷 Rc、人参皂苷 Rd、原 经系统 、免疫系统等作用独特。 目前 ，人参皂苷 Rd 人参三醇 PPT、人参皂苷 Fl、人参皂苷 F2和人参皂 已完成 Ⅱ期临床试验 ，正在开展Ⅲ期临床研究 ，有可 苷 c—K，购于南方标准物质 网；乙腈、甲醇均为色谱 能成为治疗脑 中风 的新型临床治疗药物 ，同时，在镇 纯 ；Taq酶 (配套 25mmol／LMgC12，10xBuffer)、dNTP 痛 、神经保护作用方面 ，人参皂苷 Rd有 比其他单体 Mixture(ATP、TTP、CTP、GTP)均为上海生工分装 ，其 皂苷更强 的活性 。人参皂苷 Rd在植物 中含量少 ， 余试剂均为市售分析纯。 化学结构复杂 ，化学合成至今 尚未成功 ，目前仅能从 1．1．3 仪 器 原植物的根 、茎、叶中提取 ，效率低 ，成本高，严重制约 高效液相色谱仪 (戴安 ULTIMATE3000LPG一 了人参皂苷 Rd的开发利用 。本研究组从云南文 3400A四元梯度泵 ，WPS一3000SL 自动进样器 ，PDA一 山三七根茎上分离得到能够高产人参皂苷 Rd的真 3000二极管阵列检测器，TCC一3000柱温箱 ，美国戴安 菌 ，经过形 态鉴定及 ITS分析 ，鉴定 为长枝木霉 Tri． 仪器公 司)，WatersSymmetryC18色谱柱 (250×4．6 chodermaz0ngmc Mm Rifai，关于长枝木霉转化人 m，5 m，100A)，美国Waters公司；KodakImageSta— 参皂苷为本文首次报道。