钙离子ATP酶2a基因修饰的骨髓干细胞移植治疗心肌梗塞后心力衰竭地研究.pdfVIP

全国尘左塞塑主壁监过金 ·论著· 钙离子ATP酶2a基因修饰的骨髓干细胞移植治疗 心肌梗塞后心力衰竭的研究 郭豫涛李小鹰吴迪陈平马康涛鲁小春解放军总医院老年心内科(北京，100853) 周春燕北京大学医学部生物化学系姚克群空军总医院超声科 心力衰竭是各种心脏疾病的终末发展阶段。自心力 酶：Sigma。速眠新：解放军农牧大学军事兽医研究所。 衰竭诊断起，2年病死率30％以上，6年时达80％以E， 氯胺酮：上海第一生化药业公司。Tdzol、TaqDNA多 而终末期心力衰竭2年病死率高达70％一80％。因此迫 切需要探索新的治疗手段。基因治疗和细胞移植是近年 品，购自北京鼎国生物科技中心。蛋白酶kMerk公司 发展的新策略。但是基因治疗存在寻找主要致病靶基 产品，购自北京精益化工产品公司。30％H202、4％多 因，构建安全高效的靶转移载体以及如何调控基因表达 聚甲醛、10％福尔马林、Iris碱、EDTA、氯化钠、乙 避免表达扩散等问题。细胞移植也存在移植细胞分化效 酸钠、SDS、氯仿、异戊醇：北京化工厂产品。兔抗 率，移植细胞的保护和存活率以及移植细胞功能等问 趣。基于此，拟结合两种治疗策略进行治疗心力衰竭的 酸盐抗原修复液(001McBSPH60)、FITC标记羊抗 尝试，一方面利用基因修饰保护移植细胞，增强移植细 兔IgG、辣根过氧化物酶标羊抗兔kG、DAB显色试剂 胞功能，另一方面通过在体外细胞水平转染治疗基因， 盒：北京中山生物技术公司。 在体外调控基因表达，避免表达扩散和失控等潜在危 险。 方 法 随着对心力衰竭致病分予机制的研究深入，肌浆网 reticulum 钙离子ATP酶2a(sarcoplasmicCa2+．ATPase， 一、研究对象及分组：四周龄清洁级雄性SD封闭 SERCa2a)具有增强心脏收缩和舒张功能的作用而有可 群大鼠作为骨髓供体。200--2509清洁级雌性SD封闭 能成为心力衰竭尤其是终末期心力衰竭基因治疗的突 群大鼠作为细胞移植，基因治疗受体。分组：SERCA2a 破点【L…。而在所有可用于移植的细胞中，骨髓干细胞 具有体外易分离培养扩增，不存在伦理学争论而成为最 具有临床应用前景的候选细胞之一岬l。因此，本研究 利用SERCA2a修饰的骨髓干细胞移植进行治疗心力衰 载体对照组(组IV，Ad，n=7)。 竭治疗的研究．主要比较SERCA2a基因治疗，单纯骨 髓十细胞移植．SERCA2a基因修饰的骨髓干细胞移植 二、大鼠MSCs的体外分离和培养：利用梯度离心 治疗对心肌梗死后心力衰竭大鼠的治疗作用及可能机 法和贴壁培养法分离纯化扩增大鼠MSCs。 制，探讨以骨髓干细胞作为细胞载体的可行性，为发展 细胞移植为基础的基因治疗策略提供实验基础。 长至90％汇合时，吸干培养液，加入Ad-CMV-SERCa2a 病毒工作液(MOI300)及不舍血清的IMDM孵化过夜， 材 料 吸去病毒液后以完全培养液继续培养。转染第二天荧光 显微镜观察到绿色荧光表达后收获细胞。用0．25％胰蛋 、主要仪器设备：小动物呼吸机：浙江医科大学 白酶消化细胞，观察到细胞变圆后用完全培养基终止消 医疗仪器厂。冰凉切片机：德国Leica公司。心脏超声