三种中药单体成分对猪孤雌激活囊胚细胞数与细胞凋亡影响的研究.pdfVIP

中围畜牧兽医学会动物繁殖学分会第1‘四脯学术研讨会沦文集 三种中药单体成分对猪孤雌激活囊胚细胞数 及细胞凋亡影响的研究 李冬冬，徐捷，张志刚，赵要，赵菊，相荣科，刘笑然，高建明’ 北京农学院动物科学技术系北京1022b6 摘要【目的】探讨中药单体成分川芎嗪(Ligust 胎体外发育中的促细胞增殖作用，比较不同中药单体成分添加浓度对囊胚细胞数及细胞凋亡的影响。I方法】通过双重荧光染色 和TuNEL检测法分别对猪孤雌激活第7d的囊胚进行染色，在荧光显微镜下观察囊胚的滋养层数、内细胞团数以及凋亡征象。【结 Ica2均能有效提高体外培养囊胚的细胞数目，并可能通过抑制细胞凋亡的途径促进囊胚发育。 关键词中药单体成分，囊胚细胞数目，细胞凋亡，猪 体外培养(Invi仃o 此，对胚胎质量和活力的榆测具有非常重要的意义。而胚胎的细胞数最是真实反映胚胎质量的一项客观指标，实践 证明，哺乳动物体外培养的胚胎移植妊娠率和胎儿出生率与囊胚细胞的数造密切相关，体外培养胚胎的细胞数量明 显少于体内生产的胚胎，大约有30％～70％的胚胎在发育过程中死亡，其中绝大部分发生在胚胎发育的早期。造成胚 胎死亡的原因十分复杂，可能与遗传、环境等若干冈素有关，而胚胎细胞凋亡是胚胎死亡的主要方式【”。 鉴于中药在促细胞增殖、抗氧化、保胎及促精子活力㈣等方面的研究进展以及能从整体性、多靶点、全方位改善 机体的生理状态等特点，以及本实验室通过在胚胎培养液中添加中药单体成分黄芩苷、黄芪多糖、川芎嗪、小檗碱等 中药单体成分对小鼠l一细胞、2．细胞胍胎以及在猪卵母细胞体外成熟和早期胚胎体外发育的研究摹础上【5。12l，本试 验以体外成熟培养排出第一极体的猪卵母细胞为材料，采用同一种孤雌激活方案，通过在胚胎培养液中添加不同浓 度的川芎嗪，小檗碱，淫羊藿苷三种中药单体成分，分别观察其对孤雌激活囊胚细胞数及细胞凋亡的影响，验证其促 进猪孤雌激活胚胎体外发育的作用。 1试验材料 ca为试验组，对孤雌激活的胚胎进行体外培养。本试验中的胚胎来源于各试验组别培养至第7d的囊胚。 自中国药品生物制品检定所，TUNEL试剂盒购自Roche公司外，其余试剂均购自Sigma公司。 2试验方法 中清洗5miIl，在39℃不含C02的培养箱中孵育40mm(50U L豚鼠血清并覆盖石蜡油)， 然后在39℃不含C02的培养箱中孵育90min(50uLPVA—TL．Hepes小滴中添加3．5IJ 在豚鼠补体中孵育的同时用10UL的H33342和10u 洗5min，压片，在荧光显微镜下观察并计数。 RJlase．FreeDIlase中39℃ 核和总细胞核。阳性对照的TIJNEL反应中，固定后的样本在TUNEL反应前先置于RQl 避光孵育30mill，阴性对照的TUNEL反应中，不加入酶溶液。所有试验重复三次以上。 3结果 基金项日：北京市教委资助项目(编号：KM2007l0020014) 作者简介：李冬冬(1982．)，男，甘肃静宁人，在读研究生。研究方向：动物胚胎生物技术 ’通讯作者：商建明．女，教授。E·mali：自mbac@sohu．c鲫Tel：OlO 427 Ifl困备牧曾医学会动物繁殖学分会第十pq届学术研讨会论文集 3．1川芎嗪对猪孤雌激活囊胚细胞数量的影响 各组别囊胚细胞计数结果见表l。 表1川芎嗪对猪孤雌激活囊胚细胞数量的影响 组别 观察卵数，枚 内细胞团细胞数／个 滋养层细胞数／个 总细胞数，个 IcM厂rE／％ 3 B8 Ba 4 对照组 26 3．19±O．75 32．65±4．77 35．84±4．95 0．10±0．37