鸡核基因组中存在核线粒体DNA的实验证据.pdfVIP

2012年第48卷第9期 Geneticsand B Breeding·遗l专il 鸡核基因组中存在核线粒体DNA的实验证据 王志．李藏兰，刘玉方，赵兴波‘ (中国农业大学动物科学与技术学院．北京 100193) 摘要：实验应用脉冲场电泳方法获得鸡核DNA．根据鸡线粒体DNA序列设计引物，以总DNA和核DNA为模 KNA、 板通过PCR扩增、测序和筛选鸡BAC文库方法。结果表明：鸡核DNA中普遍存在线粒体基因16S 究中，numtDNA的影响是不能忽视的。 关键词：核线粒体DNA；线粒体DNA；脉冲场电泳；鸡 中图分类号：$831．2 文献标识码：B 文章编号：0258—7033(2012)09—0007—03 因组中的numtDNA进行实验验证，并在实验方法上 Lopez等I’漕次证实猫核基因组中存在mtDNA 的同源序列，并将这些序列称为核线粒体DNA建立一套有效分离核DNA和验证numtDNA的方法。 (numtDNA)。近年来numtDNA在真核生物基因组中 1材料与方法 被陆续发现，已在大鼠、小鼠、人、鸟类、牛等80多 1．1 总DNA模板的获得取20只北京油鸡血液 个物种中报道12I。这类核基因组中类似线粒体DNA 样品，用EDTA(终浓度为1．5 的序列也被称作线粒体DNA假基因(mtDNA mg／mL)作为抗凝剂进 行抗凝。将采取的新鲜鸡m液样品参考《分子克隆 PCR扩增中，由于numtDNA pseudogenes)131。在mtDNA 实验指南第三版》酚仿抽提的方法提取总DNA。 与mtDNA存在同源序列，扩增引物可同numtDNA 1．2核基因组的获得将新提取的2斗g，浓度为 序列结合，甚至优先与numtDNA结合I，导致扩增产 200 V／em， 物中出现numtDNA序列，引起对研究结果的错误判ng／l上L总DNA在0．8％的琼脂糖中电泳(6 I和CO l h)，然后将基因组条带切下；将切下的含有DNA 断。Davis等14I发现，mtDNA的COII基因的6 X cm20 个碱基突变与阿尔茨海默疾病密切相关，但随后 的琼脂糖放入准备好的20 cm的I％低熔 III CHEF—DR 0细胞 点琼脂糖板的胶孔中，用BIO—RAD Wallaee等㈣和Hirano等161分别对无线粒体的P