从凝胶中回收银染DNA条带的研究.pdfVIP

临床检验杂志 年第 卷第 期 ， ， ， ( (( ( ! 2EFGCH:I9GJ:K2JFGFLJM7:9N:9 4LFGL((O:JP(-:P! D 文章编号： （ ） 中图分类号： 文献标识码： !!#$%’ ((!#(# )$*! + 从凝胶中回收银染,-+条带的研究! 肖学珊，张清炯，黎仕强，贾小云，郭向明，邝志和，申惶煊（中山医科大学中山眼科中心暨卫生部眼科学实验室眼遗传 分子生物学实验室，广州 ） .!% 摘要：目的 比较常规克隆测序与从凝胶中回收银染,-+条带进行直接测序和克隆测序的特点。方法 用单链构像多态法 分离杂合性突变,-+样品，然后从凝胶中回收变异的银染,-+条带进行直接测序和克隆测序，并与常规克隆测序进行比 较。结果 从凝胶中回收,-+ 片段直接测序的正确率超过 /$0，回收片段克隆测序的正确率与常规克隆测序相同，达 !0。结论 从凝胶中回收,-+片段直接测序和克隆测序较常规克隆测序简便实用，在基因克隆、突变鉴定等工作中有一 定实用价值。 关键词：聚丙烯酰胺凝胶电泳；序列分析；突变；克隆；脱氧核糖核酸回收 通过聚丙烯酰胺凝胶电泳分离123产物，银染 便方法的可行性、可靠性。 显色观察寻找差异表达或突变样品，然后对原始 ! 材料与方法 123产物克隆筛选后测序，是分子生物学实验中常 !! 标准突变标本 杂合子突变标本来自视网膜 用的方法。而在伴有非特异性扩增、或等位基因片 母细胞瘤患者血白细胞基因组 。该患者 ,-+ 35 段插入效率不同等较难筛选到目的克隆的情况下， 基因的第 外显子含有 插入的杂合性突 ! 667 8 ［］ 上述常规方法比较困难。我们以单链构像多态 ! 变 。 （ ）法分析基因突变为例，从聚丙烯酰胺凝胶中 扩增 按以前报道的条件用 法扩 4421 !# 123 123 ［］ ! 切出 变异条带，然后回收其中的单链 ， 增患者和正常人的 基因第 外显子 。 4421 ,-+ 35 ! 再进行123扩增，然后直接测序或克隆测序，对银 !$ 4421法分离,-+ 片段与银染显色 按文 ［］ 染4421差异条带中回收,-+直接测序与克隆测 献( 描述的条件进行4421分析。常规银染色法观 序的结果进行比较，并与未经聚丙烯酰胺凝胶电泳 察聚丙