肺癌组织蛋白质混合物检测方法学研究.pdfVIP

第38卷 分析化学(FENXIHUAXUE)研究报告 第9期 Chinese of 1287～1292 2010年9月 Journal AnalyticalChemistry DOI：10．3724／SP．J．1096．2010．01287 肺癌组织蛋白质混合物检测方法学研究 刘勇1，2 王荣“’2 高岚2 贾正平1，2 辛晓婷2 谢华1 马骏1 郭志强1 1(兰州军区兰州总医院全军临床药理基地，兰州730050)2(兰州大学生命科学学院，兰州730000) 摘要采用无胶筛分毛细管电泳-激光诱导荧光法(NGS．CE-LIF)检测蛋白质，考察了分离条件对分离的影 响，并对提取的肺癌组织蛋白质混合物进行分析，与毛细管电泳紫外检测(CE—uV)及常规蛋白质检测手段聚 10．O)为电极缓冲液，分离电压为15kV，柱温15℃，氩离子激光 烷(PEO，M，=300000)，以TBE缓冲液(pH 器(A。=488nln，A。。=520nln)检测。在此条件下可对6．5—200kDa范围的蛋白质进行分离，分离效果较 好，15rain内完成分离，理论塔板数(Ⅳ)均值为9．12×104／m，检出限为0．28mg／L。结果表明，本方法具有筛 分介质浓度调节简便，分离效果好，时间短等优点，具有一定的实际应用价值；对提取肺癌组织蛋白质混合 物进行检测，检测效率和效果优于CE—uV及PAGE。 关键词肺癌；无胶筛分毛细管电泳；聚环氧乙烷；异硫氰酸酯；激光诱导荧光检测；蛋白质 1 引 言 蛋白质的分离及检测在蛋白质组学研究中占有重要地位。传统聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)法检 测变性或非变性蛋白质均已比较成熟，但其检测时间较长，检出限相对较差，对于一些微量蛋白质的检 测不能满足快速、准确等要求。 毛细管电泳(CE)是近年来迅速发展起来的新型生物大分子分离分析技术，早期广泛采用毛细管凝 胶电泳对核酸、蛋白质进行分离分析，但其灌胶过程比较复杂，浓度较高时易堵塞毛细管柱¨’2J。近年 来，研究者采用无胶筛分毛细管电泳(NGS—CE)分离蛋白质，并且取得成功p柚J。其优点在于分析对象 范围广、分离效率高、分离选择性强和吸附少等，这些方法多将筛分介质溶于电泳缓冲液。文献[7，8] 以异硫氰酸酯(FITC)标记多肽和蛋白质，刘青青等一。详细介绍了CE中uV、LIF、电化学与质谱等检测 acid—EDTA 方法的应用。本实验以FITC为柱前衍生试剂，聚环氧乙烷(PEO)为筛分介质¨引，Tris—Boric Molecular Weight kDa)为 标准样品，对CE．uV、CE．LIF方法学和实验条件进行考察，并用于提取肺癌组织蛋白质混合物的检测， 与传统方法SDS．PAGE比较，以期得到一种更加方便、有效、快速的蛋白质检测方法。 2实验部分 2．1仪器与试剂 P／ACE 5000 5000型毛细管电泳仪、P／ACE station数据处理软件、P／ACE System System Systemlaser module 平(Mettler，瑞士)；磁力搅拌器(深圳天南海北实业有限公司)。 Johson 基．三(甲氧基)硅烷(MAPS，AMatthey公司)；三羟甲基氨基甲烷(Tris，上海山浦化工有限公 2009—10-29收稿；2010-03-25接受 本文系国家自然科学基金(Nos30970312)资助项目 ·E—mail：wangrong-69@163．oom 万方数据 1288 分析化学