L-异亮氨酸发酵的研究.docVIP

L-异亮氨酸发酵的研究 何　家　骏 1　材料及设备　　斜面培养基、摇瓶种子培养基(略)。1.1　一级种子培养基(%)　葡萄糖6.5，碳酸钙5.0，玉米油0.4，硫酸铵2.5，硫酸亚铁0.004g/100ml，硫酸锰0.004g/100ml，磷酸二氢钾0.35，灭菌后pH值为6.5～6.8。1.2　二级发酵培养基(%)　葡萄糖15，硫酸铵5.0，碳酸钙5.0，硫酸锰0.008g/100ml，硫酸亚铁0.004g/100ml，硫胺素240μg/100ml，生物素30μg/10ml灭菌后pH值6.0至6.5。1.3　设备　摇瓶机2台，一级种子罐600L2台，补糖罐2000吨2台，油罐150L1台，发酵罐2000L2台，氨水计量罐200L1台。721分光光度计1台，旋光计1台，分析天平1台，25型酸度计2台。 2　种子罐代谢考察　　在无菌室内，取少许菌种接入摇瓶中，放在摇瓶机上，培养20～24h，并瓶，接入种子罐。步骤如下：2.1　罐温　33～35℃。2.2　通气　通入40～50℃无菌空气，流量用进气阀门调节，开始稍为小开，8h后全开。又可以用进气与排气阀门调节，(因没装流量计)。2.3　培养周期　种子罐培养周期20～24h。2.3.1　种子罐内菌体代谢变化　　(1)pH值　培养24h后，pH稍有下降，然后再稍有回升。　　(2)糖代谢　培养过程中，糖逐渐消耗，24h稍有回升。　　(3)氨基氮　培养24h后，氨基氮稍有回升。2.3.2　菌体外观变化　摇瓶培养液接入种子罐后进行培养，开始种子液为乳白色，培养20h，转乳黄色，24h后逐渐转为浅黄色。即可移入发酵罐。 3　发酵的代谢变化　　利用压差法，将种子液无菌移入发酵罐，发酵按下列条件掌握。3.1　罐温　32～33℃。3.2　通气　通入40～50℃无菌空气，用进、排气阀门根据菌种生长情况，随时调节。3.3　发酵周期　44～48h。3.4　补糖　培养12h后，开始第1次补糖，全发酵过程补7～8次糖，每次补入100L。3.5　pH值　发酵过程中，用氨水调解，12h，开始通入氨水，每8h通入15～25L，培养30h后，氨水用量下降，36h后，停止通入氨水，L-异亮氨酸发酵代谢曲线如附图： 附图　L-异亮氨酸发酵代谢曲线 4　小　结　　从代谢曲线可知，全程用氨水调解，掌握pH值与氨基氮变化，开始通入氨水时，发酵液pH值即上升，但很快被菌体吸收及利用，pH值迅速下降。pH值、氨基氮、残糖都是重要的技术指标，要结合起来进行。用氨水调pH，在L-异亮氨酸发酵代谢中，也是大胆的尝试，一般生产厂家用尿素来控制代谢，河北省承德市第一制药厂用氨水调pH，有许多优点：来源方便，容易得到，价格便宜，在发酵过程中，容易掌握，从代谢曲线可知：糖消耗波动较大，影响因素也较为复杂，有待以后在实践中改进。　　经多批验证，发酵含量比较稳定，一般发酵含量在20mg/ml以上，最高罐批可达24.32mg/ml，建议可在大生产中推广应用。