微生物实验总结.docVIP

灭菌： 1．热力灭菌法 干热灭菌法：160-170℃，2h 高压蒸汽灭菌法：103.4kPa (121℃)，15-30min 2．紫外线灭菌：265-266nm，破坏DNA构型 培养基： 1.液体培养基——基础培养、生化反应、糖发酵管 2.固体培养基（斜面培养基）——纯培养、短期保存菌株 3.半固体培养基——检测细菌动力 化脓性球菌的分离鉴定： 致病性肠道杆菌的分离鉴定： 平板划线法 接种工具：接种环 培养基——化脓菌：血平板，肠道菌：SS平板 注意事项：菌量适当；遵守无菌操作原则，全程避免杂菌污染；划线力度、划线角度 观察细菌的形态特征 1.单染色法：观察细菌形态，但不能鉴别 2.复染色法（观察形态，鉴别细菌） 革兰染色法、抗酸染色法 3.特殊染色法——特殊结构或特殊成分的染色 常见应用：荚膜、芽胞、鞭毛、异染颗粒染色 革兰染色法： 1.涂片 标记载玻片→滴加标本→用接种环涂布均匀，形成直径约1cm菌膜 2.干燥：空气中，或酒精灯火焰上方热空气中 3.固定：迅速通过酒精灯外焰三次，冷却 4.染色 初染：滴加结晶紫，覆盖菌膜，静置1min，流水冲洗(背面) 媒染：滴加卢戈碘液，覆盖菌膜，静置1min，流水冲洗 脱色：玻片浸入95%乙醇中，冲洗至染料不再溶下为止，水洗(背面) 复染：滴加石炭酸稀释复红，覆盖菌膜，静置30s，流水冲洗(背面) 5.干燥(滤纸吸干水分)、镜检(油浸镜) 甘露醇发酵实验 培养基：甘露醇发酵管 接种工具：接种针 方法 1灭菌接种针 2从斜面沾取菌落 3接种至培养基液面下 4灭菌接种针 5培养18-24h 结果判定 阳性：蓝→黄 致病性葡萄球菌 血浆凝固酶实验 玻片凝集试验 方法 1玻片划分两格 2灭菌接种环 3分别取盐水或兔血浆于两 4取待检菌，盐水中研磨 5灭菌接种环 6取待检菌，兔血浆中研磨 7摇动玻片，2min内观察 结果判断 阳性：出现凝集 致病性葡萄球菌常(+) 药敏试验 培养基：普通平板 方法：药片扩散法 按照无菌操作原则，用接种环取少量纯培养物 接种于平板上，反复交叉密集划线 镊子灭菌，冷却，分别取4种药片，平贴于平板上，轻轻压 药片间距24mm、药片距平板边缘15mm 静置15min，平板倒置培养16-18h，观察结果 因子血清鉴定 步骤 鉴定属：A-E多价血清 鉴定组：A-E单价0抗体血清 鉴定种：H抗体血清 注意事项 血清量足够，避免干燥 每格研磨后，灭菌接种环，避免交叉污染 2min内观察结果 在SS琼脂平板上，致病性肠道杆菌菌落特征是直径小，无色或淡红色半透明，非致病性肠道杆菌的菌落特征是直径中等大小，深红色。 斜面培养基主要用于纯培养，短期保存菌株；半固体培养基主要用于检测细菌动力。分离肠道杆菌常用斜面