实验用染色液的配制.docVIP

实验用染色液的配制 1．黑色素液水溶性黑素10g，蒸馏水100mL, 甲醛（福尔马林）0.5mL。可用作荚膜的背景染色。 2．墨汁染色液? 国产绘图墨汁40mL，甘油2mL，液体石炭酸2mL。先将墨汁用多层纱布过滤，加甘油混匀后，水浴加热，再加石炭酸搅匀，冷却后备用。用作荚膜的背景染色。 3．吕氏(Loeffier)美蓝染色液 A液：美蓝(methylene blue, 又名甲烯蓝)0.3g, 95%乙醇30mL; B液：0.0l% KOH l00mL。 混合A液和B液即成，用于细菌单染色，可长期保存。根据需要可配制成稀释美蓝液，按1：10或1：100稀释均可。 4．革兰氏染色液 (1)结晶紫(crystal violet)液：结晶紫乙醇饱和液(结晶紫2g溶于20mL95%乙醇中)20mL，1%草酸铵水溶液80mL 将两液混匀置24h后过滤即成。此液不易保存，如有沉淀出现，需重新配制。 (2)卢戈(Lugol)氏碘液：碘1g，碘化钾2g，蒸馏水300mL。先将碘化钾溶于少量蒸馏水中，然后加入碘使之完全溶解，再加蒸馏水至300mL即成。配成后贮于棕色瓶内备用，如变为浅黄色即不能使用。 (3)95%乙醇：用于脱色，脱色后可选用以下(4)或(5)的其中一项复染即可。 (4)稀释石炭酸复红溶液：碱性复红乙醇饱和液(碱性复红1g, 95%乙醇l0mL, 5%石炭酸90mL混合溶解即成碱性复红乙醇饱和液)，取石炭酸复红饱和液l0mL加蒸馏水90mL即成。 (5)番红溶液：番红O(safranine，又称沙黄O)2.5g, 95%乙醇100mL，溶解后可贮存于密闭的棕色瓶中，用时取20mL与80mL蒸馏水混匀即可。 以上染液配合使用，可区分出革兰氏染色阳性(G+)或阴性(G-)细菌，G-被染成蓝紫色，G+被染成淡红色 5. 鞭毛染色液 A液：丹宁酸5.0g, FeCl3 1.5g，15%甲醛(福尔马林)2.0mL，l%NaOH 1.0mL，蒸馏水l00mL; B液：AgNO3 2.0g, 蒸馏水100mL。 待AgNO3溶解后，取出l0mL备用，向其余的90mLAgNO3中滴加NH4OH，即可形成很厚的沉淀，继续滴加NH4OH至沉淀刚刚溶解成为澄清溶液为止，再将备用的AgNO3慢慢滴入，则溶液出现薄雾，但轻轻摇动后，薄雾状的沉淀又消失，继续滴入AgNO3，直到摇动后仍呈现轻微而稳定的薄雾状沉淀为止，如雾重，说明银盐沉淀出，不宜再用。通常在配制当天便用，次日效果欠佳，第3天则不能使用。 6. 0.5%沙黄(Safranine)液：2.5%沙黄乙醇液20mL，蒸馏水80mL。将2.5%沙黄乙醇液作为母液保存于不透气的棕色瓶中，使用时再稀释。 7. 5%孔雀绿水溶液：孔雀绿5.0g，蒸馏水100mL。 8. 0.05%碱性复红：碱性复红0.05g，95%乙醇100mL。 9．齐氏(Ziehl)石炭酸复红液：碱性复红0.3g溶于95%乙醇l0mL中为A液：0.01%KOH溶液l00mL为B液。混合A、B液即成。 10．姬姆萨(Giemsa)染液 (1)贮存液：称取姬姆萨粉0.5g，甘油33mL，甲醇33mL。先将姬姆萨粉研细，再逐滴加入甘油，继续研磨，最后加入甲醇，在56℃放置1～24h后即可使用。 (2)应用液(临用时配制)：取1mL贮存液加19mL pH7.4磷酸缓冲液即成。亦可取贮存液：甲醇=1：4的比例配制成染色液。 11．乳酸石炭酸棉蓝染色液(用于真菌固定和染色)? 石炭酸(结晶酚)20g，乳酸20mL，甘油40mL，棉蓝0.05g，蒸馏水20mL。将棉蓝溶于蒸馏水中，再加入其他成分，微加热使其溶解，冷却后用。滴少量染液于真菌涂片上，加上盖玻片即可观察。霉菌菌丝和孢子均可染成蓝色。染色后的标本可用树脂封固，能长期保存。 12. 1%瑞氏(Wright’s)染色液：称取瑞氏染色粉6g，放研钵内磨细，不断滴加甲醇(共600mL)并继续研磨使溶解。经过滤后染液须贮存一年以上才可使用，保存时间愈入，则染色色泽愈佳。 13．阿氏(Albert) 异染粒染色液： A液：甲苯胺蓝(toluidine blue)0.15g，孔雀绿0.2g，冰醋酸lmL，95%乙醇2mL，蒸馏水100mL; B液：碘2g, 碘化钾3g，蒸馏水300ml。 先用A液染色1min，倾去A液后，用B液冲去A液，并染1min。异染粒呈黑色，其他部分为暗绿或浅绿。