共固定化TNF-α-IFN-γ对宫颈癌HeLa细胞的长效抑制作用.pdfVIP

离子交换与吸附，2009，25(2)：130—136 10NEXCHANGEANDADSoRP兀oN 文章编号：1001—5493(2009)02．0130．07 共固定化TNF—o,／IFN—Y对宫颈癌HeLa 细胞的长效抑制作用术 王文文 陶慧敏李志疑陈佳媚廖瑞雪郭浩然关燕清料 华南师范大学生命科学学院，广州510631 摘要：利用光化学固定方法，将TNF-a／IFNq共同固定在组织培养聚苯乙烯培养孔内，选择最 33258染色定性分析和磷 物对HeLa细胞抑制率。并采用荧光显微镜及流式细胞仪行Hoechst 脂酰丝氨酸外翻定量分析细胞凋亡．结果表明低剂量20ng／well的共固定细胞因子对HeLa细 胞的生长抑制具有时间效应，作用第5d抑制率达到92％，游离细胞因子作用第3d达到最大抑 制率76％，第6d抑制率减少到4l％．Hoechst33258细胞形态学研究显示，药物作用6d时， 20rig／well共固定细胞因子诱导的凋亡效果比游离细胞因子的更为显著．流式细胞仪磷脂酰丝 氨酸外翻定量分析表明作用第6d，20ng／well共固定药物诱导宫颈癌细胞早中期凋亡的比率比 同样浓度游离药物凋亡率高14．8％。经光化学固定后低剂量细胞因子TNF-a／IFN吖具有抑制 HeLa细胞生长与诱导HeLa细胞凋亡的活，}生，并且共固定化细胞因子的抑癌活性和药效持续性 比游离细胞因子显著。 关键词：肿瘤坏死因子．a；干扰素．Y；载体药物；光化学固定；HeLa细胞：药物活性持久性 中图分类号：Q813．1文献标识码：A 1前言 高分子载体药物具有缓释、长效优势，已成为新型药物的发展方向之一。利用光化学 固定法可以将各种多肽、酶、生长因子、蛋白质等接枝到生物医用高分子材料表面，制备 出具有各种活性、各种用途的的生物材料。Ito等已经利用光固定法成功地将生长因子uJ、 硫酸盐处理的透明质酸I21、肝磷脂【31、热敏聚合物141、促红细胞生成素【5】、p-半乳糖衍生 比游离状态的生长因子的传递信号作用时间长【lJ，光固定后的促红细胞生成素仍然具有刺 激细胞活性，并且比游离状态的高【5】。我们曾利用光化学固定法，成功地将藻蓝蛋白接枝 到聚苯乙烯培养板上，进行体外培养人肝癌细胞7402，发现固定化藻蓝蛋白对细胞抑制率 ‘收稿日期：2008年2月14日 项目基金：广东省科技项目(2006835802003) ··通讯作者E-maih 作者简介： 王文文(1982一)，女，山东省人．研究生． gyq69@163．eom 万方数据 第25卷第2期 离子交换与吸附 ·131· 由未固定化的6％提高到55％[81。 结合高分子载体药物的优势，本论文采用光化学固定方法‘9·101，将人重组肿瘤坏死因 培养聚苯乙烯(PSt)板上，制备出具有抗肿瘤活性的的高分子载体药物。研究此低剂量载 体药物对人宫颈癌HeLa细胞生长抑制作用与长效性。 2材料与方法 2．1实验试剂与材料 重组人干扰素．Y购自珠海丽珠生物工程制药厂，重组人肿瘤坏死因子一Qt购自上海赛达 medium 司。24孔组织培养板为BIOF几公司产品。RPMI1640、胰酶为GⅢCOB砒公司 产品。精致新生牛血清购自展晨生物科技有限公司。人宫颈癌HeLa细胞株，由中山大学 医学院动物中心提供。 2．2光固定化生物材料制备 性TNF-a。 ． 内，每个剂量做6个平行孔。把基板置于冰箱里自然干燥后，紫外灯(4w)下2cm处照射 15min。利用二甲基甲酰胺叠氮基十分活泼的特点，将细胞因子固定在PSt材料薄膜上。 光