单耐氧氟沙星的结核分枝杆菌耐药机制研究.pdfVIP

·论著· 单耐氧氟沙星的结核分枝杆菌耐药机制研究 王前宋媛媛池俊英王玉峰赵雁林 【摘要】 目的探讨单耐氧氟沙星的结核分枝杆菌中耐药相关基因突变及外排泵基因R墙两种不同耐药机 制的作用。方法从国家结核病参比实验室2007年全国耐药基线调查菌株库中挑选单耐氧氟沙星的菌株17株。 采用直接测序法检测利福平耐药相关基因g-))诅和母rB突变情况。提取鲫m和剐仍无突变菌株的RNA后反转 录并采用Real—timePCR方法检测20个药物外排泵基因的表达量，对比菌株最低抑菌浓度(MIC)试验结果，筛选 可能与氧氟沙星药物外排泵的相关基因，并选用大肠埃希菌为模式生物构建表达载体，检测过表达目的外排泵蛋 白的大肠埃希菌对氧氟沙星的耐药程度加以验证。结果在17株单耐氧氟沙星的菌株中，有4株(4／17)检测到 射似突变，其中包括90位点突变1株及94位点突变3株，上述突变均表现为高浓度耐药，其MIc均不低于4弘g／rnl。 time 在删伪和剐仍未突变菌株中，通过real PCR检测发现在高浓度耐药的2株菌株中，R加933和R以938的转 pg／ml。 结论本研究结果显示，删似耐药决定区基因突变与氧氟沙星高浓度耐药相关，R坦可能是氧氟沙星特异性的药 物外排泵基因，其高水平表达与氧氟沙星高浓度耐药相关。 【关键词】分枝杆菌，结核；荧光喹诺酮类；抗药性，细菌；DNA促旋酶 onoxacin—resistant mechani锄ofresistaIIceinm蚰o Study蚰the drug Mv∞6口c抛一“m机kr．c“Zos如Ⅵ缇川GQiH儿， sONG TBC0竹≠mf口ndPw㈣。 y猢咒-歹懈佗，GHU“竹一，i札g，wANGh一伽g，zHAo№礼一砌．Ⅳc捌。扎nf＆￡Pr扣r j02206，c忍i咒n ≠io佗，c凫i佗以cDc，BP巧i咒g cbr，Es如ding以“f矗or：cfⅡ扣咒一了i礼g，Emn“：旃哲¨，叫ing@如i几8f607留；z：—MOyn礼一fi竹，Em以if：z矗以吵以佗fi礼(芗 幽i札以掘。曙 ofthe relatedwith resistanceandefflux in To thefunction 【Abstract】objectiveinvestigate genes drug pump mono MethodsSeventeenmono0fX-resistantMtbclini— ofloXacin(Ofx)一resistantM．≠仳6erc“2删泌(Mtb)isolates． calisolateswereobtainedfromNationalTuberculosisReferenceLaboratory．Direct was tode— sequencingperformed themutationsin totalRNAwase)(七ractedfromtheC)fX_resistant tect the删rA／Bgenes．7I、he strains埘thOut固】m／B mutations．AfterRNAreverse levelsof20 efflux weredet