可溶性耐药相关钙结合蛋白的生物质谱分析与鉴定.pdfVIP

Vol.26 高 等 学 校 化 学 学 报 No.6 年 月 2 0 0 5 6 C~EMICAL JOURNAL OF C~INESE UNIVERSITIES 1046~1048 [研究快报] 可溶性耐药相关钙结合蛋白的 生物质谱分析与鉴定 1,2 3 1 1 1 3 刘 宁 齐 静 吕 磊 刘志强 刘淑莹 杨纯正, , , , , (1. 中国科学院长春应用化学研究所新药研究实验室 长春, 130022; 2. 吉林大学生命科学技术研究所 长春, 130021; 3. 中国医学科学院血液学研究所实验血液学国家重点实验室 天津, 300020) 关键词 可溶性耐药相关钙结合蛋白 基质辅助激光解吸离子化飞行时间质谱 二维凝胶电泳; ; 中图分类号 O657.6 文献标识码 A 文章编号 0251-0790(2005)06-1046-03 [1] 可溶性耐药相关钙结合蛋白最初由Meyers 等 从长春新碱诱导的中国仓鼠多药耐药细胞株中发 现 在多种耐药细胞株中均有高表达 它作为一种钙结合蛋白 一旦大量表达 即可改变细胞内钙环, . , , 境, 从而影响信号传导 使其它受钙调节的蛋白质的功能发生改变, . 基质辅助激光解吸离子化技术是一种现代软电离质谱技术 在对蛋白质 多肽 核酸和多糖等生, ~ ~ 物大分子的研究中发挥着越来越重要的作用[2~4]. 为了探讨肿瘤多药耐药的机制 我们采用高分辨二, 维凝胶电泳对人白血病 562及其耐药细胞 562/ 02进行蛋白差异比较分析 发现一显著差异的蛋, K K A 白质点, 进而用基质辅助激光解析飞行时间质谱技术对该点进行分析 经数据库检索鉴定为可溶性耐, 药相关钙结合蛋白 蛋白印迹实验也证实了这一结果 从而为进一步研究该蛋白在, , 562/ 02 多药耐 K A 药细胞株中的作用机制奠定了基础. 1 实验部分 1.1 试剂 预制胶条( 4.7~5.9, 17 ), 载体两性电解质( - , =4.7~5.9). IPG p~ cm Bio Lyte p~ Urea Spermine~ ~ 蔗糖~ Glycerol Tris C~APS~ ~ ~ 丙烯酰胺 甘氨酸 溴酚蓝~ ~ ~ TEMED 和考马斯亮兰 G250 均购于 Sigma 公司 抗. Sorcin 单克隆抗体购于 Santa Cruz 公司. 562 细胞系及其耐药株 K 562/ 02均由中国医学科学院血液学研究所实验血液学国家重点实验室常规保存. K A 1.2 实验过程 (1) 细胞培养及样品制备 将. 562细胞系及其耐药株 562/ 02分别培养至一定数 K K A 目后, 收集细