20cm与8cmSDS—PAGE检测钙ATP酶同工异构体分子量比较.pdfVIP

维普资讯 医学 I：程杂志2007年l2月篮13鲞笙 塑 』旦 垦驾：旦 ! 堕 ! !： ． · 375 · 论 著 · 20C1TI与 8C1TISDS—PAGE检测钙 ATP酶 同工异构体分子量 比较 杨晖 曾骏文 易长贤 I摘要】 目的 比较在蛋fLI质组学中使用的20cmSDS—PAGE和传统的8cmSDS—PAGE在细胞 膜钙ATP酶 (PMCA)同T异构体表观相对分子质量测量的差异。方法 人品状体上皮细胞 (HLEB一3 细胞)经培养至 90％融合后，收集其膜蛋 白。部分样品行 20cmSDS—PAGE，条件为 16mA／gel，然后改 为24mA／gel，共4～5h。另一部分样品行 8cmSDS—PAGE，条件为200V45min。存同一胶上同时电 泳已知相对分子质量的蛋白质标记物。分离厚的蛋白转移到PVDF膜上，用针对细胞膜钙 ATP酶 (PMCA)同 异构体PMCA1、PMCA2和PMCA4的特异性抗体进行 Western印迹检测。通过 电泳移行 距离与对数相对分子质量的线性关系计算各个同工异构体的表观相对分子质量。结果 从电泳条带 的形态上看，8cm胶中蛋白条带较细而浓集，而 20cm胶中较宽而扩散。在 8cm胶 208000和 126000 条带之间的距离为6．1mm，而存20cm胶此距离为32．8mm。在 8cm胶 126000和97000条带之间 的距离为5．2mm，而在20cm胶为20．2mm。20cm胶中各蛋 白条带的移行距离较 8cm胶增加。但 是存8cm胶中蛋白质条带的浓集性较好。在8cm胶中PMCAl、2、4的表观相对分子质量分别为 153800、153500和 152900；在20cm胶中，则分别为 153100、125500和 147400。结论 首次证实 20t：m和8cmSDS—PAGE均能成功检测HLEB一3细胞中PMCAl、2、4的存在，但是检测出的表观相对 分子质量有所不同。PMCAl、2、4的相对分子质量在8cm胶 中分别为 153800，153500和 152900， 而在 20cm胶 中分别为 l53100，125500和 147400。PMCA2很可能在 20cm胶长时问的电泳过程 中 发生 了蛋r1水解现象。 【关键词】 电泳，聚丙烯酰氨凝胶 ；ca“转运 ATP酶； F1内障 DetectionofmolecularweigiltofPMCA isoforniwith20cm SDScompared with8cm SDS- PAGE YANGHui，ZENGJun—wen，¨Chang—xian．ZhongshanOphthalmicCenter，SunYat—senUniversity， Guangzhou5l0060．China A【bstract】 Objcetive Tocomp~etheeffectsbetween20emSDS—PAGEand80cmSDS—PAGEin identifyinghumanlensepitheliumB一3(HLEB一3)cellsplasmamembranecalciumATPase(PMCA)isoform’ sapparentmolecularweight(MW)．Methods HIEB一3cellswereculturedandmembraneproteinsample werecollected．Partofthesamplewaselectrophoresisedwith20cm gel，16mA／gelandthen24mA／gelfor 4～5h．Thesamesamplewaselectrophoresisedwith8cm minige1．200V ofr45min．Proteinmarkerof known MW wasrun with thesample in the same 1．TheseperatedproteinsweretransferredtoPVDF membraneandWesternblotwasusedtoidentifythePMCA i