反相高效液相色谱法同时测定保健口服液中20种甾体激素的研究.pdfVIP

反相高效液相色谱法同时测定 保健 口服液 中20种 甾尢体激素的研究 陈永红① 鲁长豪② 肖 志 芳 ② 陶 锐③ 杨 元③ 王光建② 　　 　　　? 　 　 　 　　 　 　 　 　　　 　 　　 　 　 　　　　 　 　 　　 　　 　　　 　　　 　 　 　　　 　 　 　 　　 　 　 　 　 　 　 　 （ 中 国进 口食 品卫生监 督检验 中心 广 州 510405） ②（华西医科大学卫检教研室 成都 610044） ③（成都市卫生防疫站 成都 610041） 提要 建立了利用反相高效液相色谱法同时测定保健 口服液中20种甾体激素的方法，进行了色谱条件的优化 和样品预处理方法的探讨，并应用于市售保健口服液中微量激素的测定。最低检出量为0.16～?3.18ng，回收率 为80.5％～103.1％，相对标准偏差为3.4％～9.2％。 关键词 高效液相色谱法，甾体激素，保健口服液 2.2色谱条件 1 前言 色谱 柱:PE C18分析柱 （4.6mm 150mm， 食品中若含有激素，机体摄入量过多，会导致人 5m）；流速0.8mL/min；柱温40 ；检测波长:A通 体内分泌紊乱 ，促进幼儿过早发育，严重影响下一 道 245nm，B通道 280nm；流动相为甲醇与20 代的健康。我国和世界上许多国家，如日本、美国、加 mmol/L磷酸盐缓冲液二元体系；梯度变化:首先用 拿大以及欧洲经济共同体的国家等，均规定食品中 55％甲醇-45％(20mmol/L)磷酸盐缓冲液平衡液相 不得检出甾体激素[1～3]。测定甾体激素 目前较常用 色谱系统，然后在第一个35min内，以凸度为4的速 的方法是气相色谱-质谱法(GC-MS)[4]、放射免疫分 度变化，甲醇 由55％升至70％，在第二个35min内， 析法(RIA)[5]和高效液相色谱法(HPLC)[6]。RIA不 以凸度为3的速度变化，甲醇由70％升至100％ァ。一次 能同时分离测定多种激素，且存在放射性污染的问 分析程序完成后，用纯水清洗分析柱3min，再进入下 题；GC-MS所需仪器价格昂贵，且样品的预处理过 一个程序。流动相中甲醇比例的变化见图1。 程比较复杂；HPLC的样品预处理过程较简单，可同 时测定多种激素，仪器在我国已有逐渐普及的趋势， 分析方法易于推广。我们通过对色谱条件的优化和 样品预处理方法的探讨，建立了反相HPLC同时分 离测定保健 口服液中20种甾体激素的方法。 2 实验部分 2.1试剂及仪器 20种激素标准品分别为Sigma，Merck和中国 药品生物制品检定所产品；其余试剂均为分析纯；水 为去离子重蒸水；20mmol/L磷酸盐缓冲液；激素标 准贮备液:含每种激素lOg/L冰（箱保存）；内标溶液: 含玉米赤霉烯酮lg/L冰（箱保存）；配制流动相所用 2.3 实验方法 溶剂均通过G6玻璃砂芯漏斗抽滤，超声波脱气，氦 2.3.1 样品预处理 气脱气。高效液相色谱仪为PERKINELMERInte- 取 口服液lOmL于60mL分液漏斗中，加入 gral4000HPLC(PERKINELMER公司)。 本文收稿 日期:1995年6月16日，修回日期:1996年3月23日 10mL水，依次用10,10和5mL三氯甲烷-乙腈(9/1) 的系统适应